181008. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-helyzetben szarkozil-csoportott és 8 helyzetben alfa -hidroxi karbonsavat tartalmazó antagonista hatású angiotenzin-II analógok előállítására
13 181008 14 rogén-karbonát-oldattal kirázzuk. Szárítás után az oldatot bepároljuk és a maradékot n-hexánnal eldörzsöljük, majd leszűrjük. Az így kapott védett pentapeptidet I Rf3* = 0,75] 10 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldjuk és 15 perc múlva vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk a szabad pentapeptid-hidrokloridot [Rf4^ = 0,60], Az így kapott pentapeptid-hidrokloridot azonnal oldjuk 20 ml dimetil-formamidba, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 2,3 g (6 mmól) Boc-Val-OPfp-t adunk hozzá. A kapott oldatot a pH-érték állandó szinten tartásával egy óra hosszat állni hagyjuk, majd bepároljuk, a maradékot kloroformban oldjuk és a kloroformos oldatot 10%-os vizes citromsav-oldattal, majd n-sósavoldattal, 5%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal végül pedig vízzel kirázzuk. Szárítás után az oldatot bepároljuk, a maradékot n-hexánnal eldörzsöljük és leszűrjük. Az így kapott védett hexapeptidet [R|3) = 0,71] 10 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldjuk, az oldatot 15 percig állni hagyjuk, majd vízmentes éter hozzáadása után leválasztjuk a szabad hexapeptid-hidrokloridot [r£4) = 0,34]. Ezt a terméket azonnal oldjuk 20 ml dimetil-formamidban, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be, és 2,64 g (6 mmól) Boc-Arg(N02 )-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot állandó pH-érték fenntartása mellett egy óra hosszat állni hagyjuk, majd bepároljuk, a maradékot kloroformban oldjuk és a kloroformos oldatot 10% dimetil-formamidot tartalmazó 10%-os vizes citromsav-oldattal, majd n-sósavoldattal, azután 5%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül pedig vízzel kirázzuk. Szárítás után a kloroformos oldatot bepároljuk és a maradékot éter és etanol 8 :2 arányú elegyével eldörzsöljük és leszűijük. Az így kapott védett heptapeptidet [Rf3^ = 0,63] 10 ml 8 n dioxános sósavoldatban oldjuk, majd 15 perc múlva vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk a szabad heptapeptid-hidrokloridot, ezt szűréssel elkülönítjük, mossuk és megszárítjuk. Az így kapott szabad heptapeptid-hidrokloridot [R^s * = 0,45] 20 ml dimetil-formamidban oldjuk, az oldat pH-értékét 8-ra állítjuk be és 2,3 g (6 mmól) Z—Sar-OPfp-t adunk hozzá. Az oldatot állandó pH-érték fenntartásával 30 percig állni hagyjuk, majd 60 ml kloroformmal hígítjuk és n-sósavoldattal, majd vízzel kirázzuk. Szárítás után az oldatot bepároljuk, a maradékot éter és etanol 8 : 2 arányú elegyével eldörzsöljük, leszűijük és mossuk. Ily módon 2,36 g Z-Sar-Arg(N02)-Val- T y r (BzD-Ile-His(Dnp)-Pro-HMV-OBzl védett oktapeptidet (a His-re számított elméleti hozam 30%-a, ami lépésenként 82%-os termelésnek felel meg) kapunk; op.: 193-202 °C; R|3) = 0,30; Rp = 0,86. 4. lépés A védőcsoportok eltávolítása 2,0 g (1,25 mmól) Z-Sar-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)—Pro—HMV—OBzl 5 ml dimetil-formamiddal készített oldatához 2,8 ml 2-merkapto-etanolt adunk. Az elegyet egy óra hosszat keveijük, majd vízmentes éter hozzáadásával leválasztjuk a terméket, éterrel mossuk, metanolban oldjuk és éter hozzáadásával újból leválasztjuk. így 1,44 g dinitro-fenil-csoporttól mentes oktapeptidet (az elméleti hozam 80%-a; R^.4) = 0,41) kapunk. Ezt 30 ml 5:2:1 metanol-ecetsav-víz elegyben oldjuk, 0,7 g 10%-os palládium aktívszén-katalizátort adunk hozzá és élénk keverés közben 20 óra hosszat hidrogéngázt buborékoltatunk át az oldaton. A reakció befejeztével a katalizátort kiszűrjük, 20 ml fenti összetételű oldószereleggyel mossuk, a mosóvizet a szűrlettel egyesítjük és szárazra pároljuk. A maradékot etanol és éter 1 : 1 arányú elegyével eldörzsöljük és leszűrjük. Ily módon 0,65 g (szarkozin1,2-hidroxi-3- metíl-valeriánsav8)-Angiotenzin-lI terméket (az elméleti hozam 67%-a) kapunk. 5. lépés A fenti terméket a példák előtti leírás-részben is mertetett módon tisztítjuk; az így kapott tiszta termék jellemzői: R<6> = 0,26; R<7> = 0,52; R(8> = 0,30; aminosav-analízis: Pro 1,06 (1); Val 1,03 (1); Ile 1,03 (1); Tyr 0,65 (1); His 0,99 (1); Arg 0,95 (1); Sár 1,0(1). Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az (I) általános képletű új, angiotenzin-II hatású peptideknek X-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Y-OA (I)- e képletben X szarkozilcsoportot, Y valamely 3-6 szénatomos telített alifás alfa-hidroxi-karbonsavnak, előnyösen az L-tejsavnak vagy 2-hidroxi-3-metil-valeriánsavnak az oxigénatomon és a karbonilcsoporton keresztül kapcsolódó acilgyökét, A hidrogénatomot vagy 1-6 szénatomos alkilcsoportot képvisel és az aszimmetrikus szénatomot tartalmazó aminosav-csoportok rövidítései minden esetben L-konfigurációjú aminosavakat jelentenek -az előállítására, azzal jellemezve, hogy a) az A helyén hidrogénatomot tartalmazó vegyületek előállítása esetén valamely (II) áltáános képletű védett oktapeptid-származékról B-X—Arg(C)—Val-Tyr(D)—He—-His(E)—Pro—Y—OF (II) - e képletben B valamely a szarkozin aminocsoportjának átmeneti védelmére alkalmas, acidolízissel vagy katalitikus hidrogenolízissel eltávolítható csoportot, előnyösen benziloxikarbonil- vagy t-butiloxikarbonil-csoportot, C az Arg guanidinocsoportjának átmeneti megvédésére alkalmas védő csoportot, előnyösen nitrovagy tozilcsoportot, D a Tyr aromás hidroxilcsoportjának átmeneti védésére alkalmas védőcsoportot, előnyösen benzil- vagy szubsztituált benzücsoportot, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
