180926. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a központi idegrendszerre ható, új TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
11 180926 12 párlási maradékot 100 ml kloroformban feloldva háromszor 20 ml n sósav-oldattal, háromszor 20 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 20 ml vízzel kirázzuk, az oldatot vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd bepároljuk. Az olajos maradékot feloldjuk 20 ml etilacetátban, és az 5 °C alá hűtött oldathoz 20 ml 5 n sósavas etilacetátot öntünk. A reakcióelegyet 1 óráig jeges fürdőben tartjuk, majd éterrel hígítjuk és a csapadékot kiszűrjük, vákuumban vízmentes nátrium-hidroxid felett szárítjuk. így 3,77 g (BOC-Nva-OH. DCHA-ra számítva 70°/o) H-Nva-Tca-NH2. HCl-ot kapunk, R® =0,20. 2. lépés Benziloxikarbonil-L-piroglutamil-L-norvalil-L-tiazolidin-4-karbonsav-amid 2,8 g (10,5 mmól) H-Nva-Tca-NH2. HCl-ot szuszpendálunk 50 ml DMFA-ban és a szuszpenzióhoz, keverés közben 1,47 ml (10,5 mmól) trietilamint és 5,15 g (12 mmól) Z-Glp-OPFP-t adunk. A reakcióelegyhez 5 perc után újabb 1,47 ml (10,5 mmól) trietilamint adunk, majd további 10 perc keverés után vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk 100 ml kloroformban és az oldatot háromszor 20 ml n sósavoldattal, háromszor 20 ml n nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal és egyszer 20 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, majd bepároljuk. Az amorf maradékot éterrel eldörzsölve 4,6 g nyers terméket kapunk, amelyet etilacetát-éter elegyből átkristályosítunk. Így 3,2 g (64%) Z-Glp-Nva-Tca-NHj-ot kapunk, olvadáspont: 116—118 °C Rj =0,45, [a]|f = —129,0 (c=l, ecetsavban). 3. lépés L-Piroglutamü-L-norvalil-L-tiazolidin-i-karbonsav-amid 4,76 g (10 mmól) Z-Glp-Nva-Tca-NH2-ot feloldunk 20 ml jéghideg 3,5 n jégecetes hidrogénbromidban és az oldatot 0—5 °C-on másfél órán át állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet éterrel hígítjuk és a kivált olajról az oldószert leöntjük. A kapott olajat 50 ml vízben feloldjuk az oldatot szilárd nátrium-hidrogén-karbonáttal semlegesítjük és háromszor 20 ml éterrel kirázzuk. A vizes oldatot bepároljuk, a maradékot felvesszük 100 ml kloroformban, majd vízmentes nátrium-szulfáttal történő szárítás után a kloroformos oldatot bepároljuk és az amorf maradékot éterrel eldörzsöljük. A 3 g nyers terméket egy 80 g szilikagélből készített oszlopra visszük és a 4. oldószereleggyel eluáljuk. A tiszta terméket tartalmazó frakciókból 2,18 g amorf anyagot izolálunk, amelyet 40 ml vízben oldva derítünk, majd a víztiszta oldatot liofilizáljuk. így 1,84 g (54%) Glp-Nva-Tca-NH2-ot kapunk, R® =0,50, [a]g =—145,6° (c=l, ecetsavban). 5. példa L-Piroglutamil-L-norvalil-L-leucin-amid 1. lépés terc-ButUoxikarbonil-L-norvalil-L-leucinmetilészter 8.0 g (20 mmól) DCHA-sóból a 4. példa 1 lépésében ismertetett módon felszabadított BOCNva-OH-t és 3,82 g (21 mmól) H-Leu-OMe. HClot feloldunk 60 ml kloroformban és az oldathoz először 2,94 ml (21 mmól) trietilamint, majd jeges hűtés és keverés közben 40 ml kloroformban oldott 4,33 g (21 mmól) DCC-t adunk. A reakcióelegyet éjszaka 5 °C-on állni hagyjuk, majd a DCU-t kiszűrjük és a szűrletet háromszor 30 ml n sósavval, háromszor 30 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 30 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. A kristályos maradékot n-hexánnal eldörzsölve szűrjük és a 6,65 g nyers terméket 5 ml etilacetát és 20 ml petroléter elegyéből átkristályosítjuk. Így 5,20 g (75%) BOC-Nva-Leu-OMe-t kapunk, olvadáspont: 100—101 °C, Rf =0,48. [a]n =—47,5“ (c=l, metanolban). 2. lépés terc-ButUoxikarbonil-L-norvalü-L-leucinamid 5.0 g (14,5 mmól) BOC-Nva-Leu-OMe-t feloldunk 50 ml metanolban és az oldatba, jeges hűtés közben fél órán át ammónia-gázt vezetünk be. Az oldatot éjszaka szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd ismét lehűtjük és újra telítjük ammónia-gázzal és 4 óra állás után bepároljuk. A kristályos maradékot etilacetátéter elegyből átkristályosítjuk. így 4,37 g (91%) BOC-Nva-Leu-NH2-ot kapunk, olvadáspont : 158—159 °C, Rf =0,60 [a]o=—48,7° (c=l, metanolban). 3. lépés L-Norvalil-L-leucin-amid-hidroklorid 4,12 g (12,5 mmól) BOC-Nva-Leu-NH2-ot 15 ml etil-acetátban szuszpendálunk és a szuszpenzióhoz 20 ml 6 n sósavas etilacetátot öntünk. 1 órai állás után a reakcióelegyet éterrel hígítjuk, a csapadékot kiszűrjük és a 3,64 g nyers terméket 25 ml metanolból átkristályosítjuk. Így 2,75 g (83%) H-Nva-Leu-NH2. HCl-ot kapunk, olvadáspont: 215—216 °C, Rf =0,45, [a]^ = —3,47° (c=l, metanolban). 4. lépés Benziloxikarbonil-L-piroglutamü-L-norvalil-L-leucin-amid 2,67 g (10 mmól) H-Nva-Leu-NH2. HCl-ot feloldunk 30 ml DMFA-ban. Az oldathoz először 1,4 ml (10 mmól) trietilamint, majd a csapadék kiszűrése után 4,72 g (11 mmól) Z-Glp-OPFP-t adunk. 5 perc után újabb 1,4 ml (10 mmól) trietilamint adunk a reakcióelegyhez, majd 10 perc elteltével vákuumban bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. Az 5,5 g nyers terméket etanolból átkristályosítjuk. Így 3,84 g (81%) Z-Glp-Nva-Leu-NH2-ot kapunk, olvadáspont : 241—242 °C Rf =0,55 [a]?5 =—62,6° (c=l, ecetsavban). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
