180926. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a központi idegrendszerre ható, új TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
3 180926 4 célkitűzést igyekeztek elérni, olyan TRH-analógok előállításával, amelyeket DT-OS 2 343 035, 2 343 037, 2 449 167, 2 514 381, 2 609 154 és 2 639 393 számú német szövetségi köztársaságbeli közrebocsátási iratokban, valamint a 819 198 számú belga szabadalmi leírásban leírtak. Az eddigi ez irányú kutatás azonban, amelynek eredményeit és tapasztalatait A. J. Prange és munkatársai („The role of, hormones in depression” Life Sciences 20, 1305 (1977.)>, továbbá A. V. Schally és munkatársai („Hypothalamic regulatory hormones”, Ann. Rev. Biochem. 47, 89 (1978.)> foglalták össze, nem vezettek a terápiás szükségleteket minden tekintetben kielégítő eredményekre. Azt találtuk, hogy a három aminosavból felépülő TRH-molekula egyes aminosavainak szisztematikus cseréje révén olyan származékokhoz juthatunk, melyeknél a TRH-hormon hatása, vagy teljesen megszűnik, vagy nagy mértékben lecsökken és ugyanakkor a központi idegrendszeri hatás megmarad, sőt esetenként jelentősen emelkedik. Különösen előnyösek azok a származékok, melyekben a 2-es helyzetű His-csoport helyett egyenes, vagy elágazó szénláncot tartalmazó alifás aminosav-csoport van. A biológiai hatás szelektívebbé tétele szempontjából ugyancsak előnyösnek mutatkozott a 6-keto-pipekolinsav beépítése a molekulába a piroglutamil gyűrűrendszer helyett. A fenti meghatározásnak megfelelő (I) általános képletű tripeptideket a találmány értelmében oly módon állítjuk elő, hogy valamely (II) általános képletű vegyületet W-NH2 (II) — ahol W jelentése megegyezik az (I) általános képletnél adott meghatározás szerintivel — a) az előállítandó (I) általános képletű termék Y illetőleg X csoportjának megfelelő, adott esetben védett aminosavval kondenzálunk a megadott sorrendben, a peptidkémiában szokásos, előnyösen aktív-ész teres, vegyes anhidrides, vagy diciklohexil-karbodiimides módszerekkel, vagy b) valamely (III) általános képletű védett dipeptid-aziddal Z-X-Y-N3 (III) — ahol X és Y a fenti jelentésűek, Z pedig benziloxikarbonil-védőcsoportot képvisel — acilezünk és a kapott termékben adott esetben jelenlevő védőcsoportot ismert módon eltávolítjuk, vagy c) az X helyén L-, vagy D-piroglutamil-csoportot tartalmazó (I) általános képletű peptidek előállítása esetén az X helyén L- illetőleg D-glutaminil-csoportot tartalmazó aminosavval, illetőleg (III) általános képletű dipeptidaziddal folytatjuk le az a), vagy b) eljárásváltozat szerinti acilezési reakciót és az így kapott, X helyén L-, vagy D-glutaminil csoportot tartalmazó pepiidet ecetsavban való forralás útján alakítjuk át a kívánt, X helyén L-, illetőleg D-piroglutamil-csoportot tartalmazó (I) általános képletű peptiddé. A lépésenkénti felépítési technika alkalmazása esetén előnyösen a feleslegben alkalmazott W-NH2 kiindulási vegyületet reagáltatjuk a BOC-Y-OH védett aminosav — ahol BOC jelentése terc-butiloxikarbonil-csoport — valamely aktivált származékával, célszerűen pentafluorfenil-észterével, mikoris rendkívül rövid — néhány perces — reakcióidővel és egyszerű feldolgozással rendszerint további tisztítást nem igénylő alakban kapjuk a megfelelő BOC-Y-W NH2 dipeptid-sizármazékot. Ennek előállítására alkalmazhatjuk azonban a vegyes-anhidrides, vagy a DCC-s kapcsolási módszert is. A fenti termékből acidolizíssel nyerhető H-Y-W-NH2 szabad dipeptideket előnyösen ismét a Z-X-OH, vagy X-OH aminosav pentafluorfenilészterével reagáltatjuk mikoris a fenti előnyös módon kapjuk a megfelelő Z-X-Y-W-NH2 védett tripeptid-származékot. A Z-X-Y-N2H3 hidrazidból nyerhető (III) általános képletű aziddal történő acilezés előnye, hogy a hidrazid jól kristályosítható és ennek megfelelően igen tiszta állapotban előállítható közbenső termék. Az X helyén piroglutamil-csoportot tartalmazó vegyületek előállítása esetén a piroglutamil-gyűrű kialakítása úgy is történhet, hogy harmadik aminosavként glutamint építünk be a molekulába és a nyert tripeptidet ecetsavas közegben rövid ideig melegítjük. A bármely úton nyert Z-X-Y-W-NH2 általános képletű tripeptid-származékból előnyösen katalitikus hidrogénezéssel nyerhetők az (I) általános képletű vegyületek, melyeket azután, vagy egyszerű kristályosítással, vagy liofilezéssel, vagy pedig oszlopkromatográfiás tisztítással különíthetünk el tiszta állapotban. A találmány szerinti eljárással előállított új TRH-analógok farmakológiai hatását az alábbi biológiai módszerkkel vizsgáltuk. 1. Haloperidol-katalepszia gátlása patkányon (vö. : J. Delay és P. Deniker : Compt. Rend. Cong. Med. Alenistes Neurologistes 19, 497, Luxemburg 1952.) 40 mg/kg s. c. haloperidol után 120 perccel ellenőriztük a katalepsziát, majd az állatokat 10-es csoportokba osztottuk és TRH, illetve TRH-analógok különböző intravénás dózisaival kezeltük. A kontroll csoportokat fiziológiás nátrium-klorid-oldattal kezeltük. Az anyagok katalepszia-felfüggesztő hatását kezelés után 15, 30, 60, 90 és 120 perccel vizsgáltuk. Katalepszásnak minősítettük azokat az állatokat, amelyek ha mellső végtagjukat 7 cm magas oszlopra helyeztük, testhelyzetüket 30 másodpercen belül nem korrigálták. A kezelés hatására katalepsziát nem mutató állatok számából probit analízissel TPA 101 számítógéppel kiszámítottuk az ED50 értéket. A kísérlethez 160—180 g-os Wistar eredetű (RG) hím patkányokat használtunk. 2. L-Dopa-val kiváltott lokomotoros aktivitáspotencírozás egéren (vö. : The Thyroid Axis, Drugs and Behavior, pp. 116, A. J. Präge Jr., Raven Press, New Yrok, 1974.) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
