180925. lajstromszámú szabadalom • Eljárás központi idegrendszerre ható TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
23 180 925 24 60%) H-Leu-Pro-NH-CioHai-HCl-ot kapunk, R3 =0,17. 4. lépés Benziloxikarbonil-L-piroglutamil-L-leucil-L--prolin-n-decilamid 1,03 g (2,55 mmól) H-Leu-Pro-NH-C10H2i ■ HCl-ot feloldunk 10 ml DMFA-ban, és az oldathoz 0,36 ml (2,55 mmól) trietilamint és 1,1 g (2,55 mmól) Z-Glp-OPFP-t adunk. A reakcióelegyhez 5 perc keverés után újabb 0,36 ml (2,55 mmól) trietilamint adunk, majd további 20 perc keverés után vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot feloldjuk 20 ml kloroformban, és az oldatot ötször 10 ml n sósav-oldattal, háromszor 10 ml n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 10 ml vízzel kirázzuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, és bepároljuk. A maradék olajat éter alatt kristályosítjuk, szűrjük. így 1,22 g (78%) Z-Glp-Leu-Pro-NH-CioHat-t kapunk, olvadáspont: 108—109 °C, R2 = 0,50, [a]2£ = —74,5 ° (c = 1 ecetsavban). Elemzési eredmények a CiwHs^glS^ összképlet (molekulasúly: 612,82) alapján: számított: C 66,64%, H 8,55%, N 9,14%; talált: C 66,43%, H 8,84%, N 9,13%. 5. lépés L-Píroglutamil-L-leucil-L-prolin-n-decilamid 1,22 g (2 mmól) Z-Glp-Leu-Pro-NH-CioH2i-ot feloldunk 30 ml metanolban, és az oldaton, 0,2 g 10%-os csontszenes palládium-katalizátor hozzáadásával, 30 percig hidrogéngázt buborékoltatunk át. A katalizátor kiszűrése után a szűrletet bepároljuk, és a maradék olajat n-hexánnal kristályosítjuk. A 0,85 g nyers terméket 4 ml etilacetátból átkristályosítjuk, így 0,74 g (77%) Glp-Leu-Pro-NH-CjoH2i-t kapunk, olvadáspont: 140—141 °C, R* = 0,76. [a]g = —71,3° (c = 1, ecetsavban) aminosav-analízis: Glu 0,97 (1,0); Leu 1,00 (1,0) Pro 0,01 (1,0). 15. példa L-PirogIutamil-L-leucil-L-prolin-2-dimetilamino-etilamid I. lépés terc-Butiloxikarbonil-L-prolin-(2-dimetilamino)-eti!amid II, 43 g (30 mmól) BOC-Pro-OPFP-t feloldunk 100 ml éterben, és az oldathoz 6,54 ml (60 mmól) N,N-dimetilamino-etilamint adunk. Az oldatot 10 perc állás után háromszor 30 ml vízzel kirázzuk, a vizes oldat pH-ját szilárd nátrium-karbonát adagolásával 10-re állítjuk, és az oldatot négyszer 20 ml etilacetáttal kirázzuk. Az egyesített etilacetátos oldatot 20 ml vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, és bepároljuk. A maradék olaj állás közben kristályosodik. így 6,71 g (78,5%) BOC-Pbo-NH(CH,)2N(CH3)2-t kapunk, RJ = 0,29. 2. lépés L-Leucil-L-prolin-(2-dimetilamino)-etilamid-dihidroklorid. 6,71 g (23,5 mmól) BOC-Pro-NH-(CH2)2--N(CH3)2-t 30 ml 5 n sósavas etilacetáttal 30 percig kezelünk, majd a reakcióelegyet bepároljuk. A maradék olajat 50 ml kloroformban felvesszük, és az elegyhez 2,8 ml (20 mmól) trietilamint adunk. A keletkezett tiszta oldathoz 6,74 g (17 mmól) BOC-Leu-OPFP-t adunk, és 1 óra keverés után újabb 2,8 ml (20 mmól) trietilamint csepegtetünk hozzá, majd éjszaka állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet bepároljuk, a maradék olajat feloldjuk 50 ml vízben, az oldat pH-ját szilárd nátrium-karbonát adagolásával 10-re állítjuk, és a védett dipeptidet etilacetáttal kirázzuk. Az etilacetátos oldatot vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk, és bepároljuk. A maradék olajat 5 N sósavas etilacetáttal 1 óra hosszat kezeljük, majd a reakcióelegyet bepároljuk, és a maradékot éterrel eldörzsöljük. A szűrés után kapott amorf, erősen nedvszívó anyagot vákuumban vízmentes nátrium-hidroxid felett szárítjuk. így 4,5 g (12,1 mmól) H-Leu-Pro-NH-(CH2)2N(CH3)■>• 2 HCl-ot kapunk. R* =0,05. 3. lépés L-PirogIutamiI-L-IeuciI-L-prolin-(2-dimetiI-amino)-etilamid 2,6 g (7 mmól) H-Leu-Pro-NH-(CH2)2-N(CH3)2- 2HCl-ot feloldunk 30 ml DMFA-ban, és az oldathoz 1,96 ml (14 mmól) trietilamint adunk. A kivált csapadékot kiszűrjük, és a szúrletet, jeges hűtés és keverés közben, 3,29 g (7,7 mmól) Z-Glp-OPFP 10 ml-es DMFA-os oldatához csepegtetjük, fél óra alatt. Becsepegtetés után a reakcióelegyet 4 óra hosszat állni hagyjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradék olajat feloldjuk 50 ml vízben, és tömény sósavval pH 3-ra savanyítjuk, majd háromszor 20 ml etilacetáttal kirázzuk. Ezután a vizes oldat pH-ját szilárd nátrium-karbonát adagolásával 10-re állítjuk, és az oldatot ötször 30 ml etilacetáttal újra kirázzuk. Az egyesített etilacetátos oldatot vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. Az így kapott 3,05 g (5,6 mmól) olajos védett tripeptidet 60 ml vízben feloldjuk, az oldathoz 5,6 ml n sósavat és 0,6 g 10%-os csontszenes palládium-katalizátort adunk, majd 30 percig hidrogéngázt buborékoltatunk át rajta. A katalizátor kiszűrése után a szűrletet bepároljuk, és a maradékot n-hexánnal eldörzsöljük. A n nátrium-hidrogén-karbonát keverékében veszszük fel- Elválasztás után a kloroformos oldatot vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk, bepároljuk, és a maradékot n-hexánnal eldörzsöljük. A 2,0 g amorf nyers terméket vízben oldva derítjük, és a kapott víztiszta oldatot liofilizáljuk, így 1,72 g (60%) Glp-Leu-Pro-NH-(CH2)2- (CH3)2-t kapunk. R4f = 0,06, [a] ë = —71,7° (c = 1, ecetsavban), aminosav-analízis: Glu 1,02 (1,0); Leu 1,00 (1,0); Pro 1,03 (1,0). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
