180925. lajstromszámú szabadalom • Eljárás központi idegrendszerre ható TRH-analóg tripeptid-amidok előállítására
25 180 925 26 16. példa L-Piroglutamil-L-hisztidil-D-pipekolinsav-amid 1. lépés Benziloxikarbonil-D-pipekolinsav-amid 13,15 g (50 mmól) Z-D-Pip-OH-t [Baláspiri L. és misai: Monatsh. Chem. 101, 1177 (1970)] feloldunk 100 ml etilacetátban, az oldathoz 7,0 ml (50 mmól) trietilamint adunk, és lehűtjük —20 °C-ra. Keverés közben, ezen a hőmérsékleten, 6,5 ml (50 mmól) klórszénsav-i-butilésztert csepegtetünk az oldathoz, majd 15 perc keverés után, —10 °C-on ammóniagázt vezetünk a reakcióelegybe, másfél órán keresztül. A csapadék kiszűrése után a szűrletet a sósav-oldattal n nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. A bepárlási maradékot etilacetát-éter elegyből kristályosítva 11,5 g (88%) Z-D-Pip-NH2-ot kapunk, olvadáspont: 114—115 °C, Rj = 0,50, [a]£j = +32,0° (c = 1, metanolban). Elemzési eredmények a C14H18O3N2 összegképlet (molekulasúly: 262,30) alapján: számított: N 10,68%; talált: N 10,63%. ~ 2. lépés D-PipekoIinsav-amid 3,93 g (15 mmól) Z-D-Pip-NH-ot feloldunk 75 ml metanolban, és az oldaton, 0,5 g 10%-os csontszenes palládium-katalizátor hozzáadásával, 1 órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk át. A katalizátor kiszűrése után a szürletet bepároljuk, a bepárlási maradékot éterrel eldörzsöljük. így 1,70 g (90%) H-D-Pip-NHa-ot kapunk, olvadáspont: 161—163 °C, R* = 0,10, [a]*j = +31,0° (c = 1, metanolban). 3. lépés Benziloxikarbonil-L-glutaminil-L-hisztidin-hidrazid 71,0 g (0,165 mól) Z-Gln-His-OMe-t [H. Rappeler: Helv. Chim. Acta 44, 476 (1961)] feloldunk 700 ml DMFA-ban, és az oldathoz 33,6 ml (0,495 mól) hidrazin-hidrátot öntünk. Háromnapi állás után a reakcióelegyet 600 ml etilacetáttal hígítva éjszakára hűtőszekrénybe tesszük, majd a kivált csapadékot kiszűrjük. A 71,65 g nyers terméket 1800 ml metanolból átkristályosítva 55,1 g (78%) Z-Gln-His-N2H3-t kapunk, olvadáspont: 198—200 °C, Rf =0,28. Elemzési eredmények a C19H95O5N7 összegképlet (molekulasúly: 431,40) alapján: számított: C 52,90%, H 5,84%, N 22,72%; talált: C 52,21%, H 5,73%., N 22,78%. 4 4. lépés Benziloxikarbonil-L-glutaminil-L-hisztidil-D-pipekolinsav-amid 5,39 g (12,5 mmól) Z-Gln-His-N2H3-t szuszpendálunk 100 ml DMFA-ban, és a szuszpenzióhoz 4,6 ml (37,5 mmól) 8,1 n sósavas dioxánt öntünk. A kapott oldatot —20 °C-ra hűtjük, és —15 °C-on, keverés közben, 163 ml (13,7 mmól) terc-butil-nitritet csepegtetünk hozzá. Ezután a reakcióelegyet 20 percig —10 °C-on keverjük, majd 3,5 ml (25 mmól) trietilamint és 10 ml DMFA-ban oldott 1,57 g (12,5 mmól) H-D-Pip-NH2-ot, végül még 1,75 ml (12,5 mmól) trietilamint csepegtetünk hozzá a fenti hőmérsékleten. Becsepegtetés után a reakcióelegyet további 1 óra hosszat keverjük —10 °C-on, majd éjszaka 2 °C-on állni hagyjuk. Másnap a csapadékot kiszűrjük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, és az amorf maradékot etilacetáttal eldörzsöljük. A nyersterméket szilikagél-oszlopra visszük, és a 2. oldószereleggyel eluáljuk. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat bepároljuk, a bepárlási maradékot éterrel eldörzsöljük. így 2,76 g (42%) amorf Z-Gln-His-D-Pip-NHa-ot kapunk, R* = 0,10. 5. lépés L-Piroglutamil-L-hisztidil-D-pipekolinsav-amid 2,63 g (5 mmól) Z-Gln-His-D-Pip-NH2-ot feloldunk 50 ml ecetsavban, és az oldaton, 0,5 g 10%-os csontszenes palládium-katalizátor hozzáadásával, 1 órán keresztül hidrogéngázt buborékoltatunk át. A katalizátor kiszűrése után a szűrletet 60—70 °C-ra melegítjük, 30 percig ezen a hőmérsékleten tartjuk, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot vízben feloldjuk, és az oldatot OH-ciklusú Dowex—2 gyantán ioncserésük, és bepároljuk. Az így nyert nyers terméket szilikagél-oszlopra visszük, és az 1. oldószereleggyel eluáljuk. A tiszta terméket tartalmazó frakciókat bepároljuk, a maradékot vízben oldva derítjük, és a víztiszta oldatot bepároljuk. Az amorf maradékot vákuumban, P20-, mellett szárítjuk. így 704 mg (51%) Glp-His-D-Pip NH2-ot kapunk, R* = 0,10, [a] 17 = +16,0° (c = 1, vízben), aminosav-analízis: Glu: 1,03 (1,0); His: 1,00 (1,0); Pip: 0,96 (1,0). 17. példa L-Piroglutamil-L-hisztidil-L-homoprolin-amid 1. lépés terc-Butiloxikarbonil-L-homoprolin-amid 2,29 g (10 mmól) BOC-HPro-OH-t feloldunk 30 ml etilacetátban, az oldathoz 1,4 ml (10 mmól trietil-amint adunk, majd —10 °C-on hozzácsepegtetünk 1,3 ml (10 mmól) klórszénsav-i-butilésztert. 15 perc keverés után a reakcióelegybe, —10 °C-on, fél órán át ammónia-gázt vezetünk, majd 2 óra hosszat 0—5 °C-on állni hagyjuk. Ezután a csapadékot kiszűrjük, a szürletet bepároljuk, a maradék olajat feloldjuk 30 ml kloroformban, és az oldatot kétszer 10 ml n sósavval, kétszer 10 ml n-nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 10 ml vízzel kirázzuk. Vízmentes nátrium-szulfáttal történő szárítás után a kloroformos oldatot bepároljuk, és a maradék olajat n-hexánnal kristályosítjuk. Az 1,96 g nyers terméket etilacetát-éter elegyből át-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
