180920. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nagy rosttartalmú anyagok feltárására alkalmas cellulóz enzim-készítmény előállítására
7 180920 8 Az inokulumot 24 óra fermentáció után, amelynek során 70 liter/perces levegőztetést és 230 f,/perc keverést alkalmazunk, átoltjuk a 700 liter lesterilezeít termelő táptalajra, melynek őszszetétele : kukoricacsutkaőrlemény 6,0 % kukoricalekvár (50%-os) 1,0 % NaaHPO/,. 12 H20 0,1 % KH2PO/, 0,1 % KC1 0,05 % (NH4)2SO,, 0,2 % MgSCk . 7 H20 0,05 % FeS04.7 H20 0,001° n napraforgóolaj 0,1 % pH=5,0 A fermentációt 76 órán át folytatjuk 28—34 °C- on aerob körülmények között. 76 óra eltelte után az enzim aktivitás: CX=98Q E/ml; Cj = 11.500 E/ml. A fermentlevet keretes szűrőprésen vagy dobszűrőn elválasztjuk a micéliumtól. 620 liter 1,17 % szárazanyagtartalmú éles oldatot kapunk, amelyet ultraszűréssel szemipermeábilis membránon koncentrálunk 100 liter térfogatra. A sűrítmény szárazanyag-tartalma 1,96%; enzimaktivitása Cx =6,070 E/ml; Ci=71,300 E/ml. A sűrítményt vákuum filmbepárlón tovább töményítjük 30 liter végtérfogatra : Cx =18.200 E/ml; Ci=190.10Q E/ml. A sűrítményt 0,15% Na-benzoáttal tartósítjuk, és például a silózásban használjuk fel. Kívánt esetben porterméket állíthatunk elő, ha a sűrítményhez 3 kg karboximetil-keményítőt adunk és fluidizációs szárítón vagy porlasztva szárítón kíméletesen megszárítjuk. Ekkor 4,7 kg porterméket kapunk, amelynek enzimaktivitás'a : Cx =90 E/mg; Ci=700 E/mg. 2. példa Az enzimszintézisre felhasználandó Chaetomium globosum CH/78, (MNG 00189 dcp. szám) törzset 1,5% kukoricanövénylisztet tartalmazó Czapek-Dox sóalappal beállított agaron szelektáljuk és tartjuk fenn. Egy hetes tenyészetből fiziológiás sóoldattal 105—10° spóra/ml koncentrációjú spóraszuszpenziót készítünk, melynek 2 ml-ével oltunk 500 ml-es Erlenmeyer lombikban 100 ml inokulum táptalajt. A táptalaj öszszetétele megegyezik az 1. példában leírtakkal. A tenyészetet rázógépen (300 f/perc; 28 °C) 48 órán keresztül fermentáljuk, majd beoltjuk a 6 liter steril tápközeget tartalmazó termelő fermentorba. A táptalaj összetétele megegyezik az 1. példában leírtakkal, azzal a különbséggel, hogy a 6% kukoricacsutka-őrleményt 3%-ra csökkentjük, és a 3% lucernaliszttel egészítjük ki. A fermentációt az 1. példában leírtak szerint végezzük. A fermentáció ideje 72 óra. A kapott termék enzimaktivitása: Cx=820 E/ml; Ci= 10,900 E/ml. 3. példa (összehasonlító példa) Az oltóanyagkészítésnél az 1. példában leírtak szerint járunk el. Az inokulumba szerveden nitrogénforrásként (NH/,):!SO/, helyett 0,2% NaNO.i ot teszünk, szerves nitrogénforrásként kukoricalekvár helyett 1,5% csillagfürt növénylisztet alkalmazunk. Az inokulum 50 óra múlva válik alkalmassá továbboltásra. A termelő táptalajban a 6,0% kukoricacsutkaőrleményt 3,0%-ra csökkentjük és 3,0% csillagfürtliszttel egészítjük ki. Ammóniumszulfát helyett 0,2%-ban NaNCh-oí alkalmazunk A tápközeg egyébként megegyezik 1. példában leírtakkal. A mikroorganizmus populáció növekedésének lag fázisa jelentékenyen, mintegy 24 órával megnyúlik. Ezért a fermentációs paramétereket csak 24 órás késéssel állíthatjuk be az 1. példában megadottak szerint. A fermentáció végére, 98 órára az enzimaktivitás: C x =600 E/ml; Ci = 9,000 E/ml. Ezek az eredmények alátámasztják azt a megállapításunkat. hogy nitrát sókat tartalmazó fermentációs tápközegben mintegy 24 órával tovább tart a fermentáció, és az aktivitási titer is alacsonyabb. A feldolgozás során az 1. példában leírtak szerint járunk el, azzal a különbséggel, hogy az élesre szűrt oldatot nem tisztítjuk, ill. koncentráljuk. Cx=42 E/mg; Ci=300 E/mg enzimaktivitású por enzimet kapunk 65%-os enzimkinyerési hatásfokkal. 4. példa Az oltóanyag és inokulum készítésénél mindenben az 1. példában megadottak szerint járunk el. A termelő tápközegben 6,0% kukoricacsutkaőrlemény helyett 6,0% kukoricanövénylisztet alkalmazunk, a tápközeg egyébként azonos az 1. példákban leírtakkal. A fermentációs paramétereket az 1. példa szerint állítjuk be. 78 óra fermentációs idő elteltével Cx =930 E/ml; Ci= 10 200 E/ml enzimaktivitású fermentlét kapunk. A feldolgozás során az 1. példa szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy membránszelekciós eljárással nyert sűrítményt nem filmbepárlón pároljuk be, hanem 1,0% Kollidon 25 (polivinilpirrolidon) adagolásával fluidizációs berendezései szárítjuk. 2.8 kg Cx =165 E/mg; Ci=1280 E/mg aktivitású terméket kapunk. 5. példa Az oltóanyag és inokulum készítésénél mindenben az 1. példában megadottak szerint járunk el. A termelő tápközegben 6,0% helyett csak 3,0% kukoricacsutkaőrleményt alkalmazunk, és ezt 3,0% napraforgóhéj-liszttel egészítjük ki. A tápközeg komponensei egyébként megegyeznek az 1. példában megadottakkal. A fermentációs paramétereket az 1. példa szerint állítjuk be. 87 óra fermentációs idő elteltével Cx=637 E/ml; Ci = 10 410 E/ml enzimaktivitású fermentlét kapunk. Az enzimtartalmú fermentllevet szűrés nélkül kíméletes módon szárítjuk meg egy porlasztva szárító berendezésen. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
