180894. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 3-[/S-1'-fenil-etil-amino]-propilamino bleomicin gyógyászati szempontból elfogadható sói előállítására
5 180894 6 kezelés kezdetétől számított 5 héttel az egereket intrapffritoneálisan a vizsgálni kívánt készítmények 62,5 mcg/egér adagjával kezeltük 15 héten keresztül, heti két alkalommal. A vizsgálni kívánt készítmények adagolását követő első hét során megfigyeltük a rákképződést azon a területen, amelyet 20—MC-vel kezeltünk. Amint a 4. táblázatban látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) és az RS forma kissé hatásosabbak voltak a 20—MC-ve! kiváltott rákképződés gátlásában, mint a bleomicin komplex. 4. táblázat Mortalitás A rákképződés gyakorisága (%) %-os gátlás NK631 monoszulfát (rézmentes forma) 1/12 5/11 (45,4) 47,8 RS-forma 1/12 5/11 (45,4) 47,8 Bleomicin komplex 1/12 5/10 (50,0) 42,5 Kontroll 1/24 20/23 (86,9) 0 Amint a fenti eredményekből látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) egyértelműen jobb tumorellenes hatást mutatott, mint a kereskedelmi forgalomban levő bleomicin komplex. 3. Antimikrobiális aktivitás Az antimikrobiális hatást Mycobacterium 607-tel és Bacillus subtilis PCI-vel szemben vizsgáltuk a pohár módszerrel (cup method), összehasonlítóként bleomicin A2-t használva (1,000 U/mg). A kapott eredményeket az 5. táblázatban mutatjuk be. 5. táblázat M. 607 B. Sub. NK631 monoszulfát (rézmentes forma) 7848 1550 RS forma 7535 1400 Bleomicin komplex 1234 886 Amint az 5. táblázatból látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) és az RS forma lényegesen jobb antimikrobiális hatást mutatott mint a bleomicin komplex. 4. Toxicitás 4—1. Akut toxicitás intraperitoneális adagolás esetén (LDS0) patkányokon Amint a 6. táblázatban látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) patkányokban mutatott LD50 értéke körülbelül megegyezik a bleomicin komplex és az RS forma megfelelő értékeivel. 6. táblázat LDso mg súly/kg Megbízhatósági natárok (5%-os szigniükancia) Patkány NK631 monoszulfát (rézmentes forma) 155,0 133,6—179,8 RS forma 150,6 129,0—170,6 Bleomicin komplex 168,0 130,0—217,0 4—2. Szubakut és krónikus toxicitás patkányokban és kutyákban A patkányok és kutyák szervezetében mutatott szubakut és krónikus toxicitás tekintetében az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) hatása összevethető volt a bleomicin komplex hatásával. Külön ki kell emelni azt a tényt, hogy minden olyan kutya esetében, amelyet a bleomicin komplex nagy dózisával kezeltünk (l,2mg/kg, 90 injekció) az injektált helyen elhalás volt megfigyelhető, míg az NK63I monoszulfáttal (rézmentes forma) azonos dózisban kezelt kutyák esetében megfelelő jelenség soha nem mutatkozott. Az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) tüdőben mutatott toxicitása szintén alacsonyabb volt a bleomicin komplexénél. A fenti eredményekből megállapítható, hogy az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) toxicitása összevethető a bleomicin komplex toxicitásával, kivéve a tüdőben mutatott toxicitást és az elhalást (nekrózis). 5. összefoglalás Az eddigiekben ismertetett kísérletek eredményeiből levonható az a következtetés, hogy az NK631 jelű új vegyület gyógyászati szempontból elfogadható sói a következő tulajdonságokkal rendelkeznek: 1. A tüdőben rendkívül kis toxicitást mutatnak. 2. Antimikrobiális és antitumor aktivitásuk felülmúlja a kereskedelmi bleomicin komplex aktivitását. 3. Szisztemikus toxicitásuk nagyjából megegyezik a kereskedelmi bleomicin komplexével és 4. az injektálás helyén alacsony helyi toxicitást mutatnak. A fenti tulajdonságok következtében az NK631 gyógyászati szempontból elfogadható sói várhatóan jól hasznosíthatók a klinikai gyakorlatban. A találmány értelmében az NK631 gyógyászati szempontból elfogadható sóinak előállítása úgy történik, hogy a (II) általános képletű bleomicinsavnak a karboxil-csoporton módosított reaktív származékát N-[(S)-l’-fenil-etil]-l,3- -diamino-propánnal reagáltatjuk. Közelebbről, a vegyület előállítása úgy történhet, hogy (a) a bleomicinsavat N-[(S)-r-fenil-etil]-l,3-diamino-propánnal reagáltatjuk egy aktiváló reagens jelenlétében, vagy (b) a bleomicinsav, 3-aminopropil-észterét vagy annak N-monoszubsztituált származékát N-[(S)-l’-fenil-etil]-l,3-diamino-propannal reagáltatjuk. Ezeknek az eljárásoknak részletes leírását az alábbiakban adjuk meg. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
