180894. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 3-[/S-1'-fenil-etil-amino]-propilamino bleomicin gyógyászati szempontból elfogadható sói előállítására
3 180894 4 adagolás napi egy alkalommal, 10 egymást követő napon intraperitoneális injekció formájában történt. Az adagolás befejezése után az egereket 5 héten át neveltük. Megfigyelés után az egereket elpusztítottuk és boncolással meghatároztuk a tüdőfibrózis mértékét. A tüdőfibrózis előfordulásának gyakoriságát és a fibrózis mértékét a találmány szerinti új bleomicin-származék és az összehasonlítóként használt kereskedelmi bleomicinkomplex és RS forma esetében a következő 1. táblázatban adjuk meg. 1. táblázat Előfordulás gyakorisága Fibrózis mértéke A tüdőfibrőzist mutató egerek száma (%) Relatív érték A tüdőfibrózis teljes pontértéke /a minták teljes száma.* Relatív érték NK631 monoszulfát (rézmentes forma) 4/12 (0,33) 0,36 6/36 (0,17) 0,25 RS forma 7/12 (0,58) 0,63 12/36 (0,33) 0,49 bleomicin komplex 11/12(0,92) 1,0 24/36 (0,67) 1,0 Megjegyzés: * 0 pont: nincs fibrózis 1 pont: váladék összegyűlése az alvedában és fibrózisszerű változás az alveda válaszfalban 2 pont: Fibrózis néhány területen 4 pont: Elszórt fibrózis 6 pont: Fibrózis a teljes terület több mint 2/3-án Amint a táblázatban közölt adatokból kitűnik, az RS formával és a bleomicin-komplexszel összehasonlítva az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) adagolásának tulajdonítható fibrózis körülbelül Vi illetve l * *A részre csökken az előfordulás gyakoriságát tekintve, míg a fibrózis foka az összehasonlító készítményekhez viszonyítva Vi illetve V* részre csökken. Ezek az eredmények egyértelműen mutatják az NK631 monoszulfát hasznosságát a klinikai gyakorlatban. 2. Antitumor aktivitás 2—1. HeLa S3 sejttenyészetre mutatott hatás Valamennyi vizsgált bleomicinre kiszámítottuk az ID50 értéket az egyes bleomicinek jelenlétében 72 órás tenyésztés után tapasztalt százalékos növekedésgátlásból. Az NK631 IDjo értéke 0,82 mcg/ml-nek adódott, szemben a bleomicinkomplexnél kapott l,70mcg/ml értékkel, ami azt mutatja, hogy az NK631 kétszer olyan erősen gátolta a sejtek növekedését, mint a bleomicinkomplex. Az RS forma ID50 értékét 0,80 mcg/ml-nek találtuk, tehát az itt tapasztalt gátló hatás összevethető volt az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) növekedésgátló hatásával. 2—2. Karcinosztatikus aktivitás egereken Ehrlich karcinomára A vizsgálatokhoz 6 hetes az ICR törzsbe tartozó hímnemű egereket használtunk. Az egyes egerek lágyék részébe szubkutánúton2 x 10s sejtet transzplantáltunk. 24 óra elteltével valamennyi egeret kezeltük a vizsgálni kívánt készítményekkel a korábban az 1. és 2. pont alatt ismertetett módon. A szubkután transzplantáció 15. napján a kifejlődött daganatokat eltávolítottuk és a daganatok súlyát összehasonlítottuk a nem kezelt, kontroll csoportban kifejlődött daganatok súlyával a százalékos növekedésgátlás meghatározása céljából. Amint a 2. táblázatból látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) karcinosztatikus aktivitása összevethető volt az RS forma karcinosztatikus aktivitásával és körülbelül 1,4-szerese volt a bleomicinkomplexre kapott értéknek. 2. táblázat Dózis mg/ka x 10 %-os gátlás NK631 monoszulfát (rézmentes forma) RS forma Bleomicin komplex 2,7 84 78 67 0,9 68 60 55 0,3 39 51 49 0,1 24 51 24 0,03 19 13 21 0 0 0 0 id50 0,35 0,31 0,49 mg/kg/nap 2—3. Ascites hepatoma elleni karcinosztatikus aktivitás patkányokon A Donryu törzsbe tartozó patkányokba intraperitoneálisan 1 x K)6 AH66 sejtet transzplantáltunk. 24 óra elteltével a vizsgálni kívánt készítményeket napi egy alkalommal 10 egymást követő napon keresztül intraperitoneálisan adagoltuk. A transzplantálást követő 30 napon keresztül megfigyeltük az egyes patkányok súlyát és az elpusztult és túlélő patkányok számát. 3. táblázat Az átlagos túlélési napok relatív értékei Adag mg/kg x 10 NK.631 monoszulfát rézmentes forma RS forma Bleomicin komplex 3,12 296 298 241 1,56 269 257 257 0,78 216 196 145 0,39 163 149 116 0,19 116 121 110 0 100 100 100 Amint a 3. táblázat adataiból látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) AH66 ascites hepatomával szemben mutatott aktivitása összevethető volt az RS forma megfelelő aktivitásával, míg a bleomicin komplex aktivitását valamennyi dózisban felülmúlta. 2—4. Egereken 20-metil-kolantrénnel (a továbbiakban „20—MC”) kiváltott pikkelyes sejtkarcinoma ellen kifejtett gátló hatás A ddy törzsbe tartozó 10 hetes hímnemű egerek leborotvált hátát 18 héten keresztül, heti két alkalommal helyileg a 20—MC acetonos oldatával kezeltük. A 20—MC-vel végzett 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
