180787. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cisztein-tartalmú peptidek előállítására
7 180787 8 b) A H-Tyr(Bu')-Gln-Lcu-Glu(OBu')-Asn-Tyr(Bu')-Cys(Trt)-Asn-OBu'-trifluor-acetát kiindulási anyag előállítása b,) H-Tyr(Bu')-OMe ■ HCl 300 g (778 millimól) Z-Tyr(Bu')-OMc-t [Ann. Chem., 696. 226 (1966)] feloldunk 1 liter metanolban és automata bürettához kapcsolva, melyből mintegy 2 n metanolos sósav-oldat csöpög hozzá, 4,5 pH-értéken katalitikusán hidrogénezzük, 10%-os bárium-szulfátra lecsapott palládiumot alkalmazva katalizátorként. A hidrogénezés befejeztével leszívatjuk a katalizátort és a szűrletet bepároljuk. A maradékot eldörzsöljük éterrel. Kitermelés: 189,2 g (84,5%). Op: 154— 156 C°. [a]o = + 15,0° (c= 1, metanolban). Elem-analízis a C,4H22N0,C1 összegképlet alapján (molekulasúly: 287,79): számított: C = 58,43%; H = 7,7%; N = 4.86%; talált: C = 58,6 %; H = 7,6%; N=4,8 %. ó2)Ddz-Tyr(Bu')-OMe 71,95 g (0,25 mól) H-Tyr(Bu)-OMe ■ HCI 110 ml dimetilformamidos oldatához, jéghűtés és keverés közben hozzáadunk 35 ml (0,25 mól) trietil-amint és 79,5 g (0,3 mól) Ddz-azidot. A reakcióelegyhez, 5 perces keverés után további 35 ml (0,25 mól) trietil-amint adunk. Ezután eltávolítjuk a jégfürdőt és a reakcióelegyet szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni. 30 perc múlva hozzáadunk 7 ml (50 millimól) trietil-amint és szobahőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. A reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 250 ml etil-acetát és 250 ml víz közötti megosztásnak vetjük alá. Az etil-acetát-fázishoz előbb jeget adunk, majd háromszor mossuk 125—125 ml jéghideg, pH = 3-as citrát-puffer-oldattal, egyszer 250 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és egyszer 125 ml vízzel. Ezután vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk, bepároljuk és nagyvákuumban szárítjuk. Kitermelés: 118,2 g (99,8%) olaj. b3) Ddz-Tyr(Bu‘)-OH 118,2 g (249,5 millimól) olajos, a 3.b2) példában kapott Ddz-Tyr(Bu')-OMe-t feloldunk 500 ml 1,2-dimetoxi-etánban és hozzáadunk egy spatulyahegynyi timolftaleint. Az oldathoz keverés közben hozzácsepegtetünk 250 ml 1 n nátrium-hidroxid-oldatot. A keverést addig folytatjuk, míg elhalványul a reakcióelegy kék színe. Ezután lassanként, több részletben hozzáadunk még összesen 120 ml 1 n nátriumhidroxid-oldatot, mindaddig, míg az ólat színe már nem halványul el. (A nagyobb nátrium-hidroxid-fogyasztást a kiindulási anyag etil-acetát-tartalma magyarázza). Ezután citromsavval semlegesítjük a reakcióelegyet és bepároljuk az oldatot. A maradékhoz jeges vizet adunk és 0 C° hőmérsékleten beállítjuk a pH-t 3,5-re citromsav segítségével. A kapott olajat feloldjuk kevés etil-acetátban. Az etil-acetát-fázist kétszer 200—200 ml pH=4-es citrát-puffer-oldattal és kétszer 200—200 ml vízzel kirázzuk. Az etil-acetát-fázist vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk, lepároljuk az oldószert és nagyvákuumban szárítjuk. Sárgás-fehér amorf anyagként marad vissza a cím szerinti termék. Kitermelés: 99,5 g (86,8%). Op: mintegy 38—40C°. [u]jy = +41,5° (c=l, metilén-kloridban). Elem-analízis a C25H3,N07 összegképlet alapján (molekulasúly: 459,55): számított: C = 65,34%; H = 7,24%; N = 3,05%; talált: C = 65,0 %; H = 7,3 %; N = 3,0 %. b4) Ddz-Tyr(Bu')-Gln-ONb 25,24 g (55 millimól) Ddz-TyríBu'j-OH, 15,88 g (50 millimól) H-Gln-ONb. HCl [Chem. Bér., 110. 1—11 (1977)] és 6,75 g HOBt-monohidrát 100 ml dimetil-formamídos oldatához — 3 C° hőmérsékleten hozzáadunk 6,4 ml (50 millimól) N-etil-morfolint és 10,5 g DCC-t. A reakcióelegyet 1 órán keresztül 0 C° hőmérsékleten és 6 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd éjszakán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni. A keletkezett csapadékot leszívatjuk és a szűrletet bepároljuk. A visszamaradó olajat etil-acetátban oldjuk, az oldatot egymás után nátrium-hidrogén-karbonátoldattal pH = 3-as citrát-puffer-oldattal és vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk. A kapott olajat petroléterrel porrá dörzsöljük, majd leszívatjuk. További tisztítás céljából a kapott anyagot háromszor 100— 100 ml diizopropil-éterrel forraljuk és dekantáljuk. Végül hideg diizopropil-éterrel eldörzsöljük, leszívatjuk és petrol-éterrel mossuk. Kitermelés: 32,8 g (91%). Op: 80—90C°. [a]o = + 15,1° (c = 1, metanolban). Elem-analízis a C37H46N4On összegképlet alapján (molekulasúly: 722,81): számított: C = 61,48%; H = 6,41%; N = 7,75%; talált: C = 61,3 %; H = 6,7 %; N = 7,9 %. bs) Ddz-Tyr(Bu‘)-Gln-OH-diciklohexilamin 32,5 g (45 millimól) Ddz-Tyr(Bur)-Gln-ONb 500 ml metanolos oldatához 5 ml vizet és 10%-os bárium-szulfátra lecsapott palládium katalizátort adunk és 7 órán keresztül hidrogénezzük. Ezután leszívatjuk a katalizátort és a szűrletet bepároljuk. A visszamaradó olajat feloldjuk 250 ml etil-acetátban és hozzáadunk 11,3 ml (55 millimól) diciklohexil-amint. A reakcióelegyet néhány órán keresztül hűtőszekrényben hagyjuk állni, majd leszívatjuk a csapadékot. Etilacetáttal mozsárban eldörzsöljük, leszívatjuk és vákuumban szárítjuk. Kitermelés: 27 g (78%). Op: 170—171 C°. [a]o = + 10,2° (c=l, metanolban). Elem-analízis: a C42H64N4Og összegképlet alapján (molekulasúly: 769,0): számított: C = 65,6%; H = 8,39%; N = 7,28%; talált: C = 65,4%; H = 8,5 %; N = 7,3 %. b6) Ddz-Tyr(Bu‘)-Gln-OH 2,9 g (3,77 millimól) Ddz-Tyr(8u')-Gin-OH-diciklohexilamint etil-acetát és pH = 3-as citrát-puffer-oldat közötti megosztásnak vetünk alá. Az etil-acetát-fázist vízzel semlegesre mossuk, vízmentes nátrium-szulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. Amorf termékként kapjuk a cím szerinti vegyületet. Kitermelés: 2 g (90%). Op: 110—115 C°. [a]2D2= + 19,8° (c= 1, metanolban). Elem-analízis a C30H41N3O<, összegképlet alapján (molekulasúly: 587,68): számított: C = 61,31%; H = 7,03%; N = 7,15%; talált: C = 60,6 %; H = 7,2 %; N = 7,0 %. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
