180787. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cisztein-tartalmú peptidek előállítására
9 180787 10 b-,) Ddz-Tyr(Bu')-Gln-Leu-Glu(OBul)-Asn-Tyr(Bu')-Cys(T rt)-Asn-OBu‘ 9,7 g (16,5 millimól) Ddz-TyrfBu'j-Gln-OH-t, 19,2 g (15 millimól) H-Leu-Glu(OBu')-Asn-Tyr(Bu')-Cys(T rt)-Asn-OBu' ■ CFjCOOH-t és 2,025 g (15 millimól) HOBt-t szobahőmérsékleten keverés közben feloldunk 30 ml dimetilformamidban. Az oldatot lehűtjük 0 C° hőmérsékletre, hozzáadunk 1,95 ml (15 millimól) N-etil-morfoIint és 3,3 g (16 millimól) DCC 9 ml dímetil-formamidos oldatát. A reakcióelegyet 1 órán keresztül 0 C° hőmérsékleten és 4 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd éjszakán át állni hagyjuk, azután leszívatjuk a djciklohexil-karbamidot, amelyet kétszer mosunk 4,5—4,5 ml dimetil-formamiddal. A szűrletet keverés közben belecsurgatjuk 159 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldatba és addig keverjük, míg porszerű csapadékot kapunk. A csapadékot leszívatjuk, eldörzsöljük pH = 3-as citrát-puffer-oldattal, újból leszívatjuk és vízzel semlegesre mossuk. A csapadékot nagyvákuumban szárítjuk. Kitermelés: 23,1 g. A nyersterméket gőzfürdőn csaknem forrásig hevítjük. A híg szuszpenziót éjszakán át a hűtőszekrénybe helyezzük, majd leszívatjuk a csapadékot, amelyet etil-acetáttal és éterrel mosunk. Kitermelés: 20 g (76,8%). [a]o = — 10,2° (c= 1, metanolban). A szuszpenzió 205 C°-tól bomlik és mintegy 250 C° hőmérsékleten elszenesedik. Aminosav-analízis a C^H^NnC^S összegképlet alapján (molekulasúly: 1735,15): Asp Glu Cys Leu Tyr számított: 2,0 2,0 1,0 1,0 2,0 talált: 2,00 2,01 0,75 0,99 1,95. bs) H-TyríBu'j-Gln-Leu-GluíOBu'j-Asn-TyríBu'j-Cys(T rt)-Asn-OBu'-trifluor-acetát 3,5 g (2 millimól) Ddz-Tyr(Bu')-GIn-Leu-Glu(OBul)-Asn-Tyr(Bu')-Cys(Trt)-Asn-OBul feloldunk keverés közben 1,75 ml (20 millimól) trifluor-ecetsavból, 0,35 ml vízből és 33 ml metilén-kloridból ( = mintegy 35 ml 5%-os metilénkloridos trifluor-ecetsav, mely 1% vizet tartalmaz) és 3,5 ml anizolból álló elegyben. A reakcióelegyet 3 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd hozzáadunk 2 ml (24,8 millimól) piridint és nagyvákuumban bepároljuk. A maradékot eldörzsöljük éterrel, leszívatjuk, vízzel mossuk és foszfor-pentoxid fölött szárítjuk. Kitermelés: 3,35 g. További tisztítás céljából az anyagot feloldjuk 20 ml etilacetátban, felforraljuk, és forrón leszivatjuk. Ezt a műveletet akkor többször megismételjük, majd a maradékot éterrel mossuk. Kitermelés: 3,0 g (92%). Op: 255—265 C° (bomlás közben). [a]o = —23,8° (c=l, metanolban). Aminosav-analízis a C80HI09NnO16S ■ CF3COOH összegképlet alapján (molekulasúly: 1626,9): Asp Glu Cys L.eu Tyr számított: 2 2 1 1 2 talált: 1,95 2,08 0,81 1,07 2,04. 4. példa a) H-Cys-Ser-Leu-OH-trifluoracetát 564 g (0,97 millimól) H-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH. H20-t [Chem. Bér., 103. 2034 (1970)] feloldunk 2,5 ml etil-merkaptán és 2,5 ml trifluor-ecetsav elegyében. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 30 percig hagyjuk állni, majd beleöntjük 50 ml vízbe. A vizes fázist éterrel háromszor extraháljuk, majd liofilizáljuk. Kitermelés: 331 mg (78%). [a]p = — 15,4° (c = I, metanolban). Elem-analízis a C12H21N304SCF3C00HH20 összegképlet alapján (molekulasúly:435,4): számított: C = 38,62%; H = 5,56%; N = 9,65%; talált: C = 38,7%; H = 6,0%;-N = 9,4%. A fentiekkel azonos eredményhez jutunk, ha 564 mg H-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH ■ H20-t 11 ml trifluor-ecetsav és 11 ml tiofenol elegyében vetjük alá hasításnak, a fentiekkel egyébként azonos kísérleti körülmények között. Az S-tritilcsoportnak merkaptánokkal való lehasíthatósága függ a reakcióidőtől és a trifluor-ecetsav-koncentrációtól. A reakcióidő növekedésével a kitermelés csökken. 10 perc elteltével az éteres fázisban még nyomokban jelen van a kiindulási anyag. 30 perc elteltével sem az éteres sem a vizes fázisban nem mutatható ki kiindulási anyag. A trifluor-ecetsav-koncentráció csökkenésével (pl. 2,5 ml etil-merkaptán és 1,25 ml trifluor-ecetsav elegyével) 30 perc elteltével is kimutatható kiindulási anyag az éteres fázisban. 5. példa a) H-Ile-Cys-Ser-Leu-OH-trifluor-acetát 677 g (0,91 millimól) H-Ile-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH. 0,3 CF3COOH ■ 1,5 H20-t feloldunk 2,5 ml etil-merkaptán és 2,5 ml trifluor-ecetsav elegyében. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 30 percig keverjük és a reakcióelegyet keverés közben beleöntjük 50 ml vízbe. A vizes fázist éterrel háromszor extraháljuk, majd liofilizáljuk. Kitermelés: 506 mg (98%). [a]o = — 11,3° (c = 1, metanolban). Elem-analízis a C18H34N406SCF3C00HH20 összegképlet alapján (molekulasúly: 566,6): számított: C=42,39%; H = 6,58%; N = 9,89%; talált: C=42,4%; H = 7,0%; N= 10,6%. b) A H-Ile-Cys(Trt)-Ser-Leu-OH ■ 0,3 CF3COOHl,5 H20 kiindulási anyag előállítása bx) Ddz-Ile-OTcp 87 g (246 millimól) Ddz-Ile-OH [Ann. Chem., 763, 162— 172 ( 1972)] és 48,6 g (246 millimól) 2,4,5-triklór-fenol 700 ml etil-acetátos, 0C°-ra lehűtött oldatához hozzáadjuk 52 g (252 millimól) DCC 175 ml etil-acetátos hideg oldatát. A reakcióelegyet 3 órán keresztül 0 C° hőmérsékleten keverjük és éjszakán át állni hagyjuk. A keletkezett diciklohexilkarbamidot leszívatjuk és a szürletet vákuumban bepároljuk. A maradékot petroléterrel kristályosítjuk. Kitermelés: 105,6 g (80,5%). Op: 92—94 C° [a]jy = - 22,6° (c = 1, metanolban). Elem-analízis a C24H28N06C13 összegképlet alapján (molekulasúly: 532,86): számított: C = 54,10%; H = 5,30%; N = 2,63%; Cl = 19,96%; talált: C = 54,4%; H = 5,4%; N = 2,8%; Cl = 19,5%. 5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
