180787. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cisztein-tartalmú peptidek előállítására
5 180787 6 b) A H-Leu-Glu(OBu‘)-Asn-Tyr(Bu')-Cys(Trt)-Asn-OBu'-trifluor-acetát kiindulási anyag előállítása b]) Ddz-Leu-OTcp 33,3 g (94,3 millimól) Ddz-Leu-OH [Ann, Chem., 1973. 1652—1662] és 19,6 g (0,1 mól) 2,4,5-triklór-fenolt feloldunk 350 ml etil-acetátban. Az oldathoz 0 C° hőmérsékleten hozzáadjuk 20,4 g diciklohexil-karbodiimid (DCC) 60 ml etilacetátos oldatát. A reakcióelegyet 3 órán keresztül 0 C° hőmérsékleten és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A kivált diciklohexil-karbamidot leszívatjuk és a szűrletet bepároljuk. A maradékhoz petrolétert adunk és éjszakán át hűtőszekrénybe helyezzük. A cím szerinti termék eközben kikristályosodik. Kitermelés: 39,2 g (73,6%; H-Leu-OMe. HCl-re vonatkoztatva). Op.: 108 C° [«];]' = —31,3° (c=l, dimetil-acetamidban). Elem-analízis a C24H28N06C13 összegképlet alapján (molekulasúly: 532, S3): számított: C = 54,10%; H = 5,30%; N = 2,62%; Cl = 20,01%; talált: C = 54,7 %;H = 5,4 %;N = 2,9 %; Cl =19,3 %. b2) Ddz-Leu-Glu(OBu‘)-Asn-Tyr(Bu')-OH • 0,5 H20 21,1 g (50 millimól) H-Glu-(OBu,)-Asn-Tyr(But):OH-t [Chem. Bér., 110. 1—11 (1977)] 150 ml dimetil-formamidban szuszpendálunk, majd hozzáadunk 6,75 g (50 millimól) HOBt-t; ennek hatására a kiindulási anyag feloldódik. A reakcióelegyet ezután lehűtjük 0 C° hőmérsékletre és hozzáadunk 6,5 ml (50 millimól) N-etil-morfolint és 28 g (52,5 millimól) Ddz-Leu-OTcp-t. A kapott reakcióelegyet 1 órán keresztül 0 C° hőmérsékleten, majd 3 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Ekkor fluorám-próbát végzünk, mely szerint még nem fejeződött be a teljes amino-komponens reagálása. Még egyszer hozzáadunk 1,3 g (2,5 millimól) Ddz-Leu-OTcp-t és néhány órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Mihelyt a reakcióelegy fluorám-negatívvá válik, feldolgozzuk. Az oldószert nagyvákuumban lepároljuk és a maradékot etil-acetátban oldjuk. Jéghideg, pH = 3- as citrát-puffer-oldat segítségével 4-re beállítjuk a reakcióelegy pH-ját, majd az etil-acetát-fázist egyszer pH = 4-es citrát-puffer-oldattal és kétszer vízzel mossuk, vízmentes nátriumszulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A maradékot eldörzsöljük 1 : 1 arányú éter-petroléter-eleggyel, néhány órán keresztül hűtőszekrénybe helyezzük, majd leszívatjuk. Kitermelés: 35,35 g (80,25%). Op.: 222—223 C°. [a ]d = —23,7° (c= 1, metanolban). Elem-analízis a C44H65N5Ojg ■ 0,5 H20 összegképlet alapján (molekulasúly: 881,04): számított: C = 60,00%; H = 7,55%; N = 7,95%; talált: C = 60,0 %; H = 7,6 %; N = 8,0 %. b 3) Ddz-Leu-Glu(OBu1)-Asn-T yr(Bu')-Cys(T rt)-Asn-OBu1 26,4 g (30 millimól) Ddz-Leu-Glu(OBu j-Asn-Tyr(Bu')-OH-hemihidrát, 16,0 g (30 millimól) H-Cys(Trt)-Asn-OBul és 4,05 g (30 millimól) HOBt 60 ml dimetil-formamidos, 0C° hőmérsékletre lehűtött oldatához hozzáadjuk 6,6 g DCC 20 ml dimetil-formamidos, 0 C° hőmérsékletre lehűtött oldatát. A reakcióelegyet 2 órán keresztül 0 C° hőmérsékleten és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd leszívatjuk a keletkezett diciklohexil-karbamidot és azt 20 ml dimetil-formamiddal mossuk. A szűrletet keverés közben óvatosan beleöntjük mintegy 250 ml lehűtött nátrium-hidrogén-karbonát-oldatba és 600 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az etil-acetát-fázist egymás után a következő oldatokkal rázzuk ki: 300 ml nátrium-hidrogén-karbonát-oldat, 300 ml pH = 4-es citrát-puffer-oldat és 100 ml nátrium-hidrogén-karbonát-oldat, majd vízmentes nátriumszulfát fölött szárítjuk és bepároljuk. A maradékot eldörzsöljük éterrel. Kitermelés: 28—34 g (67—81%). Op.: 161—165 C°. [u]n = — 13,1° (c=l, metil-kloridban). Elem-analízis a C74H98N8016S összegképlet alapján: számított: C = 64,05%; H = 7,12%; N = 8,07%; S = 2,31%; talált: C = 63,8 %; H = 7,3 %; N = 8,0 %; S = 2,7 %. b4) H-Leu-Glu(OBu,)-Asn-Tyr(Bu,)-Cys(Trt)-Asn-OBu‘-trifluor-acetát 27,75 g (10 millimól) Ddz-Leu-Glu(OBu)-Asn-Tyr(Bu')-Cys(Trt)-Asn-OBu'-t szobahőmérsékleten hozzáadunk 17,5 ml (0,2 mól) trifluor-ecetsavból, 3,5 ml vízből és 330 ml metiíén-kloridból ( = mintegy 350 ml 5%-os metilén-kloridos trifluor-ecetsav, mely 1% vizet tartalmaz) álló elegyhez. A kapott reakcióelegyet 2 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd lehűtjük 0 C° hőmérsékletre, a trifluor-ecetsavat 17,75 ml (220 millimól) piridinnel semlegesítjük és a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk. A maradékot feloldjuk 250 ml etil-acetátban és háromszor kirázzuk 25- 25 ml vízzel. Az etil-acetát-fázist — szárítás nélkül — bepároljuk. A maradékot nagyvákuumban szárítjuk, majd éterrel eldörzsöljük. (Dietil-éter helyett alkalmazhatunk diizopropil-étert is). A csapadékot leszívatjuk, éterrel mossuk és szárítjuk. Kitermelés: 25,2 g. További tisztítás céljából mintegy 6 g-os mennyiségeket feloldunk 30 ml etil-acetátban, felforraljuk és melegen centrifugáljuk. A csapadékot éterrel kétszer eldörzsöljük, centrifugáljuk és nagyvákuumban foszforpentoxid fölött szárítjuk. Kitermelés: 22,3 g (86%). Op.: 178—182 C°, 161— 164C°, 166—171 C°. [a]52 = -3,5— + 4,0° (c=l, 90%-os ecetsavban). Elem-analízis a C64H85N8014SF3 összegképlet alapján (molekulasúly: 1279,5): számított: C = 60,08%; H = 6,70%; N = 8,76%; S = 2,51%; talált: C = 59,4 %; H = 6,5 %; N = 9,l %; S = 2,9 %. 3. példa: a) H-Tyr-Gln-Leu-Glu-Asn-Tyr-Cys-Asn-OH-trifluor-acetát 814 mg (0,5 millimól) H-Tyr(Bu‘)-Gln-Leu-Glu(OBu')-Asn-TyríBu'FCysjTrtj-Asn-OBu'-trifluor-acetátot feloldunk 5 ml etil-merkaptán és 5 ml trifluor-ecetsav elegyében. A reakcióelegyet 4 órán keresztül szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd beleöntjük 50 ml vízbe. A vizes fázist éterrel háromszor extraháljuk, majd liofilizáljuk. Kitermelés: 590 mg (98%). [a]o = - 15,3° (c = 1, 90%-os ecetsavban). Elem-analízis a • CF3COOH ■ 2H20 öszszegképlet alapján (molekulasúly: 1196,2): számított: C = 47,19%; H = 5,73%; N= 12,88%; S = 2,68%; talált: C=47,0 %; H = 5,6 %; N= 12,0 %; S = 3,0 %. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
