180783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás timozinÓ1(inex lent) és/Asn2(index fölt)/-analógjai előállítására
5 18078? 6 val kapott termék) kondenzáljuk. A kívánt Boc-Asp(OBzl)-Leu-Lys(Z)-GIu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-Obzl képletű védett tetradekapeptidet jó hozammal kapjuk. A termék vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint homogén. Ha a kapott védett vegyületet vízmentes hidrogénfluoriddal kezeljük, majd a terméket ioncserés oszlopkromatográfiával tisztítjuk, a megfelelő, Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-GluGlu-Ala-Glu-Asn képletű szabad tetradekapeptidhez jutunk. Hasonló módszerekkel alakítjuk ki a H3C-CO-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Ala-Ala-Val-Asp(OBzl)-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-Ile-Thr(Bzl)-Thr(Bzl)-Lys(Z)-OH képletű, védett amino-végcsoportot tartalmazó tetradekapeptidet egy acetil-tetrapeptid-fragmens, egy hexapeptid és egy további tetrapeptid összekapcsolásával. A reakciókat a peptid-szintézisben szokásos, ismert módon hajthatjuk végre. Az acetilamino-végcsoportot hordozó tetrapeptid előállítása során H3CCO-Ser(Bzl)-OH-céziumsó és benzilbromid reakciójával H3C-CO-Ser(Bzl)-OBzl-t állítunk elő, majd ezt a vegyületet hidrazinolízisnek vetjük alá. A H3C-CO-Ser(Bzl)-NHNH2 képletű tiszta, kristályos, szilárd hidrazin-származékot jó hozammal kapjuk. Egy külön műveletben a Boc-Ala-Ala-OH képletű dipeptid védőcsoportjának lehasításával HCI • H-Ala-Ala-OH-t állítunk elő, és ezt a dipeptidet Boc-Asp(OBzl)-OSu-val kapcsoljuk. A képződött Boc-Asp(OBzl)-Ala-Ala-OH képletű védett tripeptidet diciklohexilaminsója formájában különítjük el. Ezután az amino-védőcsoportot lehasítjuk, és a kapott terméket Honzl és Rudinger módszerével [Collection Czech. Chem. Commun. 26, 2333 (1961)] a H3C-CO-Ser(Bzl)-HNNH2 képletű hidrazín-származékkal kondenzáljuk. A képződött, H3C-CO-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Ala-Ala-OH képletű, részlegesen védett tetrapeptidet DCC és HOBT jelenlétében ekvivalens mennyiségű hidrazinnal reagáltatjuk. Ekkor a kívánt tetrapeptid szintézisében közbenső termékként felhasználható, H3C-CO-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Ala-Ala-HNNH2 képletű vegyülethez jutunk. A Boc-Val-Asp(OBzl)-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser((Bzl)-Glu(OBzl)-HNNH2 képletű védett hexapeptidet a C-terminális aminosavból kiindulva, lépésenkénti lánchosszabbítással állítjuk elő. Az első műveleti lépésben H-Glu(OBzl)-OH és Boc-Ser(Bzl)-OSu kapcsolásával a Boc-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-OH képletű védett dipeptidet alakítjuk ki, majd e vegyület Boc-csoportját lehasítjuk, és a kapott terméket Boc-Ser(Bzl)-OSu-val reagáltatjuk. Boc-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-OH képletű védett tripeptidet kapunk. A vegyület amino-védőcsoportját lehasítjuk, majd a képződött HCI • H-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-OH képletű sót Boc-Thr(Bzl)-OSu-val reagáltatjuk. Az így kapott Boc-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-OH képletű védett tetrapeptid Boc-csoportját tetrahidrofurános közegben végzett sósavas kezeléssel lehasítjuk, és a képződött vegyületet Boc-Asp-(OBzl)-OSu-val reagáltatjuk. Boc-Asp(OBzl)-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-OH képletű védett pentapeptidet kapunk. E vegyület Boc-csoportját sósavas kezeléssel lehasítjuk, majd a kapott HCI • H-Asp(OBzl)-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-OH képletű sót Boc-Val-OSu-val kapcsoljuk. Tiszta, kristályos termék formájában Boc-Val-Asp(OBzl)-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl) OH-t kapunk. Ezután a kapott hexapeptid terminális glutaminsav-részéhez kapcsolódó a-karboxil-csoportot specifikus reakcióval, DCC kapcsolószer alkalmazásával, HOBT jelenlétében hidrazid-csoporttá alakítjuk. Reagensként ekvivalens mennyiségű hidrazint használunk fel. A Boc-Val-Asp(OBzl)-Thr(Bzl)-Ser(BzI)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-HNNH2 képletű védett hexapeptid-hidrazidot tiszta, kristályos, szilárd anyag formájában, megfelelő hozammal kapjuk. A Boc-Ile-Thr(Bzl)-Thr(Bzl)-Lys(Z)-OH képletű védett tetrapeptidet a fentihez hasonló lépésenkénti szintézissel, Anderson és munkatársai módszerével [J. Am. Chem. Soc. 86, 1839 (1964)] alakítjuk ki. Boc-Thr(Bzl)-OSu és H-Lys(Z)-OH reakciójával olajos termék formájában Boc-Thr (Bzl)-Lys(Z)-OH képletű dipeptidet állítunk elő, majd az a-amino-csoporthoz kapcsolódó védőcsoportot lehasítjuk, és a kapott vegyületet Boc-Thr(Bzl)-OSu-val reagáltatjuk. Kristályos szilárd anyag formájában Boc-Thr(Bzl)-Thr(Bzl)-Lys(Z)-OH képletű védett tripeptidet kapunk. E vegyület Boc-csoportját lehasítjuk, majd a kapott, HCI • H-Thr(Bzl)-Thr(Bzl)-Lys(Z)-OH képletű sót Boc-Ile-OSu-val reagáltatjuk. A képződött, Boc-Ile-Thr(Bzl)-Thr(Bzl)-Lys(Z)-OH képletű védett tetrapeptidet szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Tiszta, kristályos terméket kapunk. Ezután a fenti tetrapeptid-fragmens amino-végcsoportjához kapcsolódó védőcsopórtot lehasítjuk, majd a kapott vegyületet azid-módszerrel a fentiek szerint előállított, Boc-Val-Asp(OBzl)-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-HNNH2 képletű védett hexapeptiddel kapcsoljuk. A Boc-Val-Asp(OBzl)-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-Ile-Thr(Bzl)-Thr(Bzl)-Lys(Z)-OH képletű védett dekapeptidet jó hozammal kapjuk. A kapott dekapeptid Boc-csoportját trifluorecetsavval lehasítjuk, majd a kapott vegyületet azid-módszerrel a korábban ismertetett módon kialakított, védett amino-végcsoportot tartalmazó, Ac-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Ala-Ala-HNNH2 képletű védett tetrapeptiddel kapcsoljuk. E lépésben a H3C-Co-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Ala-Ala-Val-Asp(OBzl)-Thr(Bzl)-Ser(Bzl)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-Ile-Thr(Bzl)-Thr(Bzl)-Lys(Z)-OH képletű védett tetradekapeptidhez jutunk. Az (I) általános képletű vegyület kialakítása során a fenti acetil-tetradekapeptidet DCC-vel és HOBT-vel aktiváljuk, majd a kapott aktív észtert TFA • H-Asp(OBzl)-Leu-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl-lel reagáltatjuk (az utóbbi reagenst a megfelelő, védett tetradekapeptid és trifluorecetsav reakciójával alakítjuk ki). Termékként H3C-CO-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Ala-Ala-Val-Asp(OBzl)-Thr(BzI)-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-IIe-Thr(Bzl)-Thr(Bzl)-Lys(Z)-Asp(OBzl)-Leu-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Lys(Z)-Lys(Z)-Glu(OBzl)-Val-Val-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-Asn-OBzl képletű, védett acetil-oktakozapeptidet kapunk. E vegyületet vízmentes hidrogénfluoriddal reagáltatva az összes védőcsoportot lehasítjuk, és a kapott peptidet ioncserés kromatográfiával tisztítjuk. Timozan-a^et kapunk. Hasonló eljárással állítjuk elő a H3C-CO-Ser(Bzl)- Asp(OBzl )-Ala-Ala-Val-Asp(OBz 1 )-Thr(Bz 1 )-Ser-(Bz 1 )-Ser(Bzl)-Glu(OBzl)-Ile-Thr(Bzl)-Thr(Bzi)-Lys(Z)-OH képletű védett tetradekapeptidből a megfelelő, H3C-CO-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-OH képletű szabad tetradekapeptidet. Az [Asn2]-timozin-a!-et a timozin-arhez hasonló szintézissel alakítjuk ki. A szintézisben felhasznált közbenső termékek — a H3C-CO-Ser(Bzl)-Asn-Ala-Ala-HNNH2 képletű, acetilamino-végcsoportot hordozó tetrapeptid-hidrazid kivételével — megegyeznek a korábban felsoroltakkal. A H3C-CO-Ser(Bzl)-Asn-Ala-Ala-HNNH2 képletű vegyületet a következőképpen állítjuk elő: Boc-Ala-Ala-OH-ból Boc-Ala-Ala-OBzl-t állítunk elő, majd e vegyület Boc-csoportját sósavas kezeléssel szelektí 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
