180723. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fáldalomcsillapító hatású pentapeptid-származékok előállítására
23 180723 24 lemző sávjai (deutero-kloroforrnös oldatban felvéve): 8- 2,90, N—CH3: 8 1,45, tefcier-butil-csoport; 8 = =4,9—4,5, CH. 80 ml dimetil-formamidban feloldjuk a fenti módon nyert terméket és —15 C° hőmérsékletre hűtjük az oldatot. 3,6 ml (0,027 mól) klór-szénsav-izobutil-észtert, majd 2,99 ml (0,027 mól) TsT-metil-morfolirít adunk az elegyhez. 10 percig —15 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd f órán keresztül vízmentes ammóniagázt buborékoltatunk bele. További 4 órán át ’—15 C? hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd jég és 1 normál nátrium-hidrogén-karböhát-öldat elegyére öntjük. Diefil-éterrel kirázzuk a hideg, vizes oldatot, hideg, 0,75 normál cítromsav-oldattal, majd vízzel mossuk a dietil-éteres oldatot, vízmentes mágnézium-szulfáton megszárítjuk, és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Dietil-éter és petroléter elegyéből kristályosítjuk a maradékot, ily módon 1,7 g-nyi (26%0) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op.: 56— 59 C°, [a]” = —127,6° (c=0,5, kloroform). NMR- spektrumának jellemző sávjai (kloroformos oldatban felvéve): 8 — 2,80, N—CH3: 8= 1,46, terciér-butil-csoport; 8=4,9—4,5, a-CH. Analízis a CnH2|N203S képlet alapján (261,36): számított: C 50,55%; - H 8,10%: N 10,72%; talált: C 50,56%; H 7,93%; N 10,51%. C) N^-Tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanil-N1- -metil-S-etil-L-cisztéinil-amid 20 ml jégecet, 1 ml trietil-szilán és 4 ml anizol elegyéhez hozzáadunk 2,5 g (9,5 milliótól) NMercier-butoxi-karbonil-N’-metil-S-étil-L-ciszteiníl-amidot. Fél órán át vízmentes sósavgázt vezetünk az eíegybe, majd dietil-éter hozzáadásával kicsapjuk a sósavas sót (1,8 g). 25 ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a sót, 0 C° hőmérsékletre hütjük az oldatot, és 1,31 ml trietil-amin hozzáadásával semlegesítjük. Ezután az elegyhez hozzáadunk 2,65 g (0,01 mól) N*-tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanint, majd 1,35 g (0,01 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és végül 2,06 g (0,01 mól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 C° hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána ismét 0 C° hőmérsékletre hütjük, kiszűrjük a kivált csapadékot, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, hideg, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Kloroformban feloldjuk az ily módon nyert szirupszerű anyagot és az oldatot feívisszük egy Grade 62 jelzésű, Grace—Davidson-féle szilikagéllel töítötf, 3;: 45 cm méretű oszlopra. Először kloroformmal, majd 10%-ig növekvő mennyiségű metanolt is tartalmazó kloroformmal mossuk az oszlopot. Vékonyrétegkromatográfiával vizsgáljuk az oszlopról lejövő frakciókat, és a megfelelő frakciókról egyesítve, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert, ily módon 3,0 g-nyi mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, [<*]“= —77° (c=0,5, metanol). Analízis a C2(1H31N30.4S képlet alapján (409,5): számított; C 58,65%; H 7,63%; N 10,26%: talált: C 58,87%; H 7,41%; N 9,81%. 12 D) N’-Tercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicin-diciklohexil-ammóniumsó 150 ml izopropil-alkoholban feloldjuk a 46,80 g N’-tercier-butoxi-karbonil-O-benzil-L-tifozil-D-alanjl-glicin-benzil-észterből az 1. példa E) pontjában leírt módon végzett hidrogenolízis útján nyert terméket, és hozzáadunk 16 ml (0,081 mól) diciklohexil-amint. Dietil-éterrel körülbelül másfél liter össztérfogatra egészítjük ki az elegyet. Addig dörzsölgetjük a kivált félszilárd anyagot, amíg megszilárdul, ekkor kiszűrjük és megszárítjuk. Ily módon 46,04 g (98%,), 194,5—197 C°-on olvadó anyagot nyerünk. Forralás közben 100 ml metanolban feloldjuk a nyersterméket, hozzáadunk 500 ml izopropil-aíkoholt, és nitrogénáramban körülbelül 150 ml össztérfogatra betöményítjük az oldatot. Lehűléskor kikristályosodik a termék. Éjszakán át állni hagyjuk az elegyet és másnap kiszűrjük és megszáritjuk a csapadékot. Ily módon 41,44 g (88%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, op. : 198—200,5 C°, [a]“ - = + 17,9° (c=l, metanol). Analízis a C3|H50N4O7 képlet alapján (590,8): számított : C 63,03% ; H 8,53%, ; N 9,48%; ; talált: C 62,95%; FI 8,77%; H 9,20%. E) N'-Tercicr-butoxi-karbonil-l.-tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N’-metil-S-etil-L-ciszíeinil-amid 20 ml jégecet, 3 ml anizol és 3 ml trietil-szilán elegyéhez hozzáadunk 2,5 g (6,1 millimól), a C) pontban leírt módon nyert terméket. 25 percen át vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe, majd dietil-étert adunk hozzá, lehűtjük és kiszűrjük a kivált csapadékot, ily módon 1,9 g (5,5 millimól) sósavas sót nyerünk. 25 ml dimetil-forntamidban feloldjuk ezt a sót, lehűtjük az oldatot, és hozzáadunk 3,2 g (5,5 millimól) NMercier-butoxi-karbonil-L-tirozil-D-alanil-glicil-diciklohexil-ammóniumsót. 10 percig 0 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd hozzáadunk 0,74 g (5,5 millimól) 1-hidroxi-benzotriazolt, és 1,1 g (5,5 millimól) N,N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 Cc hőmérsékleten, majd 48 órán át 4 C° hőmérsékleten keverjük az elegyet. Kiszűrjük a kivált csapadékot, és a szűrletről csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Etil-acetátban feloldjuk a maradékot, és egymás után 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, vízzel, 0,75 normál citromsav-oldattal és végül megint vízzel mossuk az etil-acetátos oldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Ily módon 3,5 g nyersterméket nyerünk. Kloroformban feloldjuk a nyersterméket, és az oldatot felvisszük egy Grade 62 jelzésű, Grace—Davidson-féle szilikagéllel töltött, 3x45 cm méretű oszlopra. Először kloroformmal, majd 10%-ig növekvő mennyiségű metanolt is tartalmazó kloroformmal mossuk az oszlopot. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok alapján azonos anyagot tartalmazó frakciókról egyesítve, csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószereket, ily módon 2,4 g-nyi (62%ó) mennyiségben nyerjük a kívánt tiszta terméket, [a]” = — 30,7° (c = =0,5, metanol). Analízis a C34FI48N6OgS képlet alapján (700,86): számított: C 58,27%; H 6,90%; N 11,99%; talált: C 58.14%; H 6,98%; N 11,94%% 5 10 lí 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
