180723. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fáldalomcsillapító hatású pentapeptid-származékok előállítására
25 26 180723 Az aminosav-analízis talált értékei : tirozin: 1,01 : alanin: 1,00; glicin: 1,00; fenil-alanin: 0,98; NH3: 1,09. F) L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-L-N’-' ' -metil-S-etil-císz-tieníl-amid-acetát 20 ml jégecet, 2 ml anizol és 2 ml trietil-szilán elegyéhez hozzáadunk 2,2 g (3 millimól), a/ Ej pontban leírt módon nyert terméket. 25 percig vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybé. Utána dietil-étert adunk az elegyhez és behűtjük. Kiszűrjük a kivált csapadékot, és triegszárítjuk (2,0 g). Ë csapadék egy 1,2 g-nyi részletét annyi puffer-oldatban (1% pírídínt és 0,05% ecetsavat tartalmazó víz) oldjuk, hogy az oldat össztérfogata 10 ml legyen. DEAE—Sephadex A 25-tel (acetát-fázisban) töltött, 2,5x99 cm méretű, előzőleg ugyanezzel a puffer-oldattal egyensúlyba hozott oszlopra visszük fel a fenti módon nyert 10 ml oldatot. 280 nm hullámhossznál mérjük az oszlopról lejövő frakciók fényabszorpcióját, a megfelelő frakciókat egyesítjük, és fagyasztva szárítjuk. 10%-os ecetsav-oldatból újra fagyasztva szárítva, majd víz és acetonitril 75 : 25 arányú elegyéböl még egyszer fagyasztva szárítva 0,59 g-nyi mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, [«]d = + 9,9° (c=0,5, 1 normál sósav-oldat). Analízis a C3|H44Nb08S képlet alapján (660,79): számított : C 56,35% ; H 6,71 % ; NI 2,72% : S 4,85%; talált: C 56,63%; H 6,72%; N 12,63%; S 4,69%. Az aminosav-analízis talált értékei: tirozin: 1,00; alanin: 1,01; glicin: 1,00, fenil-alanin: 0,98; NH3: 1,09. 7. példa L-Tirozil-D-alanil-glicil-L-fenil-alanil-N'-metil-L-leucil-amid-acetát AJ N,-Tercier-butoxi-karbonil-N“-métif-L-Ieucin-d(+)a-metil-benzil-ammóniumsó 20 ml dietil-éterhez hozzáadunk 12,5 g (0,05 mól) N4- -tercíer-butoxi-karbonil-L-Ieucin-hidrátot. Magnézium-szulfáton megszárítjuk az oldatot, majd csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. 75 ml tetrahidro-furánban feloldjuk a maradékot és 0 C° hőmérsékleten, mechanikus keverés közben, 35 perc alatt 27,9 g, ásványi olajjal készült, 22,1%-os kálium-hidrid-diszperzió (0,154 mól kálium-hidrid), 0,25 g 18-korona-6-éter és 200 ml tetrahidro-furán elegyéhez csepegtetjük a fenti tetrahidro-furános oldatot. Ezután 15 perc alatt az elegyhez csepegtetjük 6,4 ml metíl-jodid 10 ml tetrahidro-furánnal készült oldatát. 3 órán át 0 C° hőmérsékleten tartjuk az elegyet, majd hozzácsepegtetjük 5 ml ecetsav és 5 ml tetrahidrofurán elegyét, és utána 5 ml etanolt. 500 g jégre öntjük az elegyet és 1 normál nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával körülbelül 9-re állítjuk be az elegy pH-ját. Dietil-éterrel kirázzuk a vizes oldatot, majd szilárd citromsav adagolásával pH = 3-ra savanyítjuk a vizes részt. Dietil-éterrel kirázzuk a megsavanyitott vizes oldatot, vízzel mossuk, majd vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk az egyesített dietil-éteres oldatokat. Ledesztilláljuk az oldószert csökkentett nyomáson, ily módon 13,2 g (107%) nyersterméket nyerünk. A nyerstermék vékonyrétegkromatográfiás vizsgálata még bizonyos mennyiségű réágálatlan kiindulási anyag jelenlétét mutatja! Diétil-éterben feloldjuk a nyerstermékét és hozzáadunk 5,25 m) (0,05 rriöl) 5 tercier-butíl-amint. Petroléterrel hígítjuk ádiétil-etéi'és oldatot és egy éjszakán át behűtve tartjuk. Kiszűrjük a kivált csapadékot (5,4’ g). 1 normal citrómsa^-oídaftáí, majd vízzel mossuk a szűrfetét, vízmentes mágnézíum-szulfáton megszáritjuk, és csökkentett nyomáson je- 10 desztilláljuk az oldószereket. 100 ml dietil-éterberi feloldjuk a desztillációs maradékot (6,45 gY és hozzáadunk 3,39 g (0,026 mól) d( • )a-meti1-benzil-amint. Egy éjszakán át behűtve tartjuk az elegyét," és utána kiszűrjük a kivált csapadékot. Ily módon 9,09 g ’métíríyf- 15 ségben (49% össztermeléssel) nyerjük a kívánt termeket, op.: 120—122 C°, 14,1er(c = 1, metanol). Analízis a C20H34N2O4 képlet alapján (366,5): számított: C 65,54%; H 9,35%; ' N 7,64%; ' ' talált: C 65,83%; H. 9,05%; N T,35%. " 20 B) N’-Tercier-butoxi-karbonil-N’-metíl-L-leucil-amid 80 ml dimetil-formamídhoz hozzáadjuk a 11j5 g, az AJ pontban leírt módon nyért (0,047 mól) N’-tercier- 25 -butoxi-karbonil-N’-metil-L-Ieucinból citromsavval végzett semlegesítés és ezt követő dietil-éteres kirázás útján nyert bázist. Utána —15 C° hőmérsékletre hűtjük az elegyet, és hozzáadunk 6,7 ml (0,052 mól) klór-szénsav - -izobutil-észtert és 5,7 ml (0,052 mól) N-metíl-morfo- 30 lint. 10 percen át” 15 <C‘ hőmérsékletén keverjük az elegyet, majd egy órán át vízmentes ammóniagázt vezetünk az elegybe. Utána tóvábbi 4 órán át —15'<ÍB "hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd jég és T normál nátrium-hidrogén-karbonát-óldat elegyére öntjük. Di- 35 etil-éterrel kirázzuk a hideg elegyet és 0,75 normál citromsav-oldattal, majd vízzel mossuk a diëtil-ètérei;1 bldatot. Vízmentes magnézium-szulfáton mégszáritjúk és csökkentett nyomáson ledesztilláljuk az oldószert. Dietil-éter és petroléter elegyéböíkristályosítjuk a’rhârâ- 40 dékot, ily módon 5,5 g-nyi "(48%) mennyiségben nyerjük a kívánt terméket, óp. : 127—128 <7°; [z]d=— 42,2e (c 1. metanol). Analízis a CI2H24N2Ö3 képlet alapján (244,3): számított: C 58,99%; H 9,90%; N 11,47%; " 45 talált: C 59,17%: H 9,66%;; N H,’2Í'%. C) N’-Tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanil-N’’-metil-L-leucil-amid 30 ml jégecet, 3 ml anizol és 3 ml trietil-szilán elegyéhez hozzáadunk 5,0 g (0,02 mól), a Éj pontban leírt módon nyert terméket. 25 percen át vízmentes sósavgázt vezetünk az elegybe. Utána dietil-étert adunk hozzá, és behűtjük. Kiszűrjük és megszáritjuk a kivált csapadékot (3,6 g). 60 ml dimetil-formamidban feloldjuk ezt a sót, 0 C° hőmérsékletre hűtjük az oldatot, és hozzáadunk 3,99 ml (0,02 mól) diciklohexil-amint. 10 percig 0 CJ hőmérsékleten keverjük az elegyet, majd hozzáadunk 5,3 g (0,02 mól) Na-tercier-butoxi-karbonil-L-fenil-alanint, és utána 2,7 g (0,02 mól) 1-hidroxi-benzotriazolt, végül pedig 4,12 g (0,02 mól) N.N'-diciklohexil-karbodiimidet. 2 órán át 0 CD hőmérsékleten, majd 24 órán át szobahőmérsékleten keverjük az elegyet. Utána ismét 0 C° hőmérsékletre hütjük az elegyet, kiszűrjük a kivált csapadékot, és a szűrletről csökkentett 50 55 60 65 13
