180539. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-amino-szuberinsavat tartalmazó kalcitoninszerű új polipeptid előállítására
3 1805,39 4 nélfogva az (I) képletű polipeptid immunológiailag azonos anyag a természetes humán-kalcitoninnal, és ebből következőleg gyógyászatilag nagyon biztonságos, és nem rendelkezik keresztimmunitással sertés- vagy lazac-kalcitoninnal szemben. Az (I) képletű vegyidet szintézise a szokásos peptidszintézis-módszerekkel oldható meg, azaz a-amino-szuberinsavat, egy aminosavat és/vagy 2—4 aminosavbóL álló^pepiidet kondenzálunk az (I) képlet aminosavszekVenciájának megfelelő sorrendben, és az alábbi képletnek megfelelő szerkezeti részegységet (CH2),COOR H-Gly-Ans-Leu-Ser-Thr-NHCHCO-— ahol R jelentése reakcióképes észtercsoport — a peptidegység felépítésének valamely szakaszában gyűrűzárásra késztetjük, és a reakcióképes csoportok védőcsoportjait a reakciósorozat valamely szakaszában eltávolítjuk. Kívánt esetben a termék savaddíciós sójává alakítható. A szintézis kiindulási anyagainál vagy köztitermékeinél alkalmazott védőcsoportok peptidszintézisnél szokásos védőcsoportok, és könnyen eltávolíthatók hidrolízissel, savas hasítással, redukcióval, aminolízissel vagy hidrazinolízissel. Az aminocsoport védhető szokás szerint például valamilyen acilcsoporttal, így formil-, trifluoracetil-, ftaloil-, benzolszulfonil-, p-toluolszulfonil-, o-nitro-fenil-szulfenil-vagy 2,4-dinitro-fenil-szulfenil-scporttal ; valamilyen aralkil-csoporttal, így benzil-, difenil-metil- vagy trifenil-metil-csoporttal (ezek a csoportok tetszés szerint valamilyen rövidszénláncú alkoxi-, például o-metoxi- vagy p-metoxi-csoporttal lehetnek szubsztituálva) ; valamilyen benziloxi-karbond-csoporttal, így benziloxi-karbonil-, (o-bróm-benziloxi)-karbonil-, (p-bróm-benziloxi)-karbonil-, (o-klór-benziloxi)-karbonil-, (p-nitro-benziloxi)-karbonil-, (p-metoxi-benziloxi)-karbonil-, (p-fenilazo-benziloxi)-karbonil- vagy [p-/p’-metoxi-fenilazo)-benziloxi]-karbonil-csoporttal ; valamilyen alifás oxikarbonilcsoporttal, így ciklopentiloxi-karbonil-, (triklór-etoxij-karbonil-, terc-amiloxi-karbonil-, terc-butoxi-karbonil- vagy (diizopropil-metoxi)-karbonil-csoporttal ; vagy valamilyen aral-kiloxi-karbonil-csoporttal, így (2-fenil-izopropoxi)-karbonil-, (2-tozil-izopropoxi)-karbonil- vagy [2-/p-difenil)izopropoxij-karbonil-csoporttal. Az aminocsoportok enamin-képzéssel is védhetők 1,3-diketonokkal, így benzoil-acetonnal, acetil-ace tonnai vagy dimedonnal reagáltatva. A karboxilcsoport amidképzéssel, hidrazidképzéssel vagy észterképzéssel védhető. Az amid-csoport 3,4-dimetoxi-benzil- vagy bisz/p-metoxi-fenil)metilcsoporttal szubsztituálható. A hidrazid-csoport benziloxi-karbonil-, (triklór-etoxi)-karbonil-, trifluor-acetil-, terc-butoxi-karbonil-, tritil- vagy [2-/p-difenil/izopropoxi]-karbonil-csoporttal szubsztituálható. Az észtercsoport valamilyen alkanollal, például metanollal, etanollal, terc-butanollal vagy ciano-metanollal ; valamilyen aralkanollal, például benzil-alkohollal, (p-bróm-benzil)-alkohollal, (p-klór-benzil)-alkohollal, (p-metoxibenzilj-alkohollal, (p-nitro-benzil)-alkohollal, (2, 4,6-trimetil-benzil)-alkohollal, benzhidril-alkohollal, (benzoil-metil)-alkohollal,[p-bróm-benzoil)metilj-alkohollal vagy [p-klór-benzoil)-metil]-alkohollal ; valamilyen fenollal, például 2,4,6-triklór-fenollal, 2,4-5-triklór-fenollal, pentaklór-fenollal, p-nitro-fenollal, 2,4-dinitro-fenollal, p-ciano-fenollal vagy p-metánszulfonil-fenollal ; vagy valamilyen tiofenollal, például tiofenollal, tiokrezollal vagy p-nitro-tiofenollal képezhető. A szerinben, treoninban vagy tirozinban lévő hidroxilcsoport tetszés szerint észterezéssel vagy éterképzéssel védhető. Észterező védőcsoport például valamilyen rövidszénláncú alkanoilcsoport, így az acetilcsoport; valamilyen aroilcsoport, így a benzoilcsoport; vagy karbonilcsoportból levezethető valamilyen csoport, így benziloxi-karbonil- vagy etoxi-karbonil-csoport. Éterképző védőcsoport például benzil-, tetrahidropirand- vagy terc-butil-csoport. A hidroxilcsoport védése 2,2,2-trifluor-l-(terc-butoxi-karbonil-amino)-etil- vagy 2,2,2-trifluor-l(benziloxi-karbonil-amino)-etil-csoporttal is megoldható. A hidroxiesoportokat nem mindig kell azonban védeni. A hisztidinben levő iminocsoport benzil-, tritil-, benziloxi-karbonil-, tozil-, adamantiloxi-karbonil-, 2,2,2 - tr ifluor-1- (tere - butoxi - karbonil - amino) -etilvagy 2,2,2,-trifluor-l-(benziloxi-karbonil-amino)-etil-csoporttal védhető, bár az iminocsoportot nem mindig szükséges védeni. A kiindulási vagy köztitermék peptideket aminosavaknak vagy — előnyösen 2—4 aminosavból álló — peptideknek az (I) képlet aminosavszekvenciájának megfelelő sorrendben végzett kondenzációjával szintetizáljuk. Például egy védett aaminocsoporttal és aktivált terminális karboxilcsoporttal rendelkező aminosavat vagy pepiidet reagáltatunk egy szabad a-aminocsoporttal és védett terminális karboxilcsoporttal rendelkező aminosavval vagy peptiddel. Másrészt egy aktivált a-aminocsoporttal és védett terminális karboxilcsoporttal rendelkező aminosavat vagy peptidet reagáltatunk szabad terminális karboxilcsoporttal és védett a-aminocsoporttal rendelkező aminosavval vagy peptiddel (176. 623. számit magyar szabadalmi leírás). A karboxilcsoport például savazidként, savanhidridként, sav-imidazolidként vagy aktív észterként aktiválható, így ciano-metil-észterré, tiofenil-észterré, p-nitro-fenilészterré, p-nitro-tiofenilészterré, p-metánszulfonil-fenilészterré, tiodilészterré, 2,4-dinitro-fenilészterré, 2,4,5-triklór-fenil-észterré, 2,4,6-triklór-fenilészterré, pentaklór-fenilészterré, N-hidroxi-szukcinimid-észterré, N-hidroxi - ftálimid - észterré, 8 - hidroxi - konolil -észterré vagy N-hidroxi-piperidil-észterré alakítva, karbodümiddel, N,N’-karbonil-diimidazollal vagy valamilyen izoxazólium sóval, így Woodward-reagenssel. A karboxilcsoport szokásos módon, például savazidként, savanhidridként, aktív észterként vagy karbodiimiddel aktiválható. Előnyös kondenzációs reakció a Wünsch-módszer, az azidos módszer, az aktív észteres módszer 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
