180515. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ergot-alkaloidok elválasztására és/vagy arányuk beállítására
3 180515 4 nyitott arányát szabályozni, és az arány utólagos beállítására sem áll rendelkezésre módszer. További problémát jelent, hogy a bioszintézisnél a kívánt, hatásos alkaloidokon kívül mindig keletkeznek hatástalan C-8-epimerek (ergokrisztinin, ergokorninin, a- és ß-ergokriptinin) is. Ezek hasznosítására különböző epimerizációs eljárásokat kidolgoztak ugyan (például 142 095 számú magyar szabadalmi leírás), megoldatlan viszont maguknak a C-8 epimereknek egymástól való elválasztása, illetve az egyes C-8 epimerek arányának beállítása. Végül meg kell oldani a bioszintézis útján kapott, ergotoxin-típusú alkaloidok ergotamin-mentesítését. E probléma megoldására nagyüzemi megvalósításra alkalmatlan preparatív jellegű módszer ismeretes [113 109 számú csehszlovák szabadalmi leírás, illetve ennek cikkben közölt változata: M. Beran, M. Semonsky: Ceskoslovenská Farmacie 11 440—448 (1962)]. A módszer lényege, hogy kétfázisú oldószer-rendszerrel, nevezetesen egy savasvizes fázisból és egy 1—2 szénatomos haloalkános fázisból álló kétfázisú oldószer-rendszerrel szakaszosan extrahálják az ergotoxin-csoportba és ergotamin-csoportba tartozó alkaloidok keverékét, és az extrakció végén a haloalkános fázisból az ergotoxint, a savas-vizes fázisból az ergotamin-típusú alkaloido(ka)t kinyerik. E módszer tehát bizonyos alkaloid-csoportok egymástól való elválasztását megoldja. Minthogy azonban a savas-vizes fázisban az alkaloidok igen rosszul oldódnak, (körülbelül 0,2 súly% oldódik egy-egy alkaloid-komponensből) nagymennyiségű extrahálószer, illetve nagyméretű berendezés szükséges az eljárás kivitelezéséhez. Az alkaloidkoncentráció növelésével zavaró emulzió-képződés tapasztalható és az amúgy is kicsi megoszlási hányados érték (körülbelül 0,1 a savas vizes fázisban lévő alkaloid koncentráció és a halo-alkános fázisban lévő alkaloid-koncentráció hányadosa) a koncentráció növelésével egy lineáris szakasz után még csökken is. Összefoglalva megállapíthatjuk, hogy e módszer üzemi méretben még alkaloid csoportok elválasztására sem alkalmazható. Kísérleteink során azt találtuk, hogy ha a csoport-elválasztásra már alkalmazott kétfázisú, 3 komponensű oldószerrendszerhez negyedik komponensként egy mind a savas-vizes, mind a haloalkános oldószeres fázissal elegyedő protikus oldószert is adunk, akkor az alkaloidok oldhatósága az eddiginek mintegy 50— 100-szorosára növekszik anélkül, hogy az extrakció szelektivitása romlana, vagy stabil emulzióképződés lépne fel. Egy ilyen négy komponensű kétfázisú rendszerben tehát az alkaloid-csoportok elválasztása ipari méretben is megoldható. Azt találtuk továbbá, hogy a negyedik oldószerkomponens a megoszlási hányadost is rendkívüli módon megnöveli. A 4. komponens hatását vizsgálva az is kiderült, hogy hatására az egyes ergotoxintípusú alkaloidok megoszlási hányadosai különbözőképpen nőnek meg; nevezetesen legjobban az ergokornin, kevésbé az a-argokriptin és legkevésbé a ß-ergokriptin megoszlási hányadosa növekszik. Ez a különbség módot ad arra, hogy ezeket az alkaloidokat egymástól el tudjuk választani, illetve, hogy az extrakció menetének valamilyen analitikai módszerrel történő követése esetén az extrakció során ezek arányát megfelelően tudjuk szabályozni. Kísérleteink során azt is megállapítottuk, hogy ezzel a négy komponensű, kétfázisú oldószer-rendszerrel a C-8 epimerek is elválaszthatók egymástól, illetve ezek aránya is szabályozható. Megoldható továbbá az ergotaminintól történő elválasztásuk is. A 4. komponensként számításba jöhető oldószereket megvizsgálva azt találtuk, hogy a protikus oldószerek közül elsősorban a metanol, etanol, vagy formamid alkalmas a kívánt hatás elérésére. A vizsgált oldószerek legelőnyösebb képviselője a formamid. A savat, vizet és protikus oldószert, előnyösen formamidot tartalmazó fázist és az aprotikus szerves oldószeres fázist kívánt esetben egymással összekeverjük, majd szételegyedni hagyjuk. A szétvált fázisok egymásra nézve gyakorlatilag telítettek. A két fázist külön-külön, előzetes Összekeverés, majd szételegyítés nélkül is alkalmazhatjuk. Az aprotikus fázist a továbbiakban A-fázisnak, a savas-vizes-protikus oldószeres fázist a továbbiakban B-fázisnak nevezzük. A találmány tárgya tehát eljárás ergo toxin típusú alkaloid-keverékek komponenseinek, illetve a megfelelő C-8 epimer-keverókek komponenseinek egymástól és/vagy ergotam intól, illetve ergotaminintól történő szelektív elválasztására vagy az ergotoxin-típusú alkaloid-keverékek szűkebb körébe eső ergokornint a- és ß-ergokriptint tartalmazó keverékek komponensei, illetve a megfelelő C-8 epimer keverékek komponensei arányának beállítására és adott esetben ergotamintól, illetve ergotaminintól történő elválasztására kétfázisú oldószerrendszerrel történő extrakció útján, azzal jellemezve, hogy az alkaloid-keveréket aprotikus szerves oldószerben (A-oldószer), vagy egy minimum 1% mennyiségben vizet, valamint a pH érték 1,8—5,0, előnyösen 2,0—3,5 közé történő beállításához szükséges mennyiségben savat és a fennmaradó részben az A-oldószerrel is elegyedő protikus oldószert tartalmazó elegyben (B oldószer) oldjuk, majd az oldatot az A- és B-oldószereknek, mint kétfázisú oldószer-rendszernek alkalmazásával extraháljuk, és a két fázisnak megfelelő két végtermékes extrák - turnból a termékeket, nevezetesen a) ergotoxin-típusú alkaloid(ok)nak ergotamintól, illetve a megfelelő C-8-epimer(ek)nek ergotaminintól történő elválasztása esetén az ergotaxin típusú alkaloid(ok)at, illetve a megfelelő C-8 epimer(ek)t az A-oldószeres, az ergotamint, illetve az ergotaminint a B-oldószeres fázisból, vagy b) az ergotoxin-típusú alkaloidok, illetve a megfelelő C-8-epimerek szűkebb körébe eső ergokornin, a- és ß-ergokriptin keverékek, illetve a megfelelő C-8 epimer-keverókek szelektív elválasztása esetén az ergokornint, illetve C-8 epimerjét a B-oldószeres, az a- és ß-ergokriptint, illetve a megfelelő C-8 epimereket az A-oldószeres fázisból, vagy c) aránybeállítás és adott esetben az ergotamintól, illetve ergotaminintól való elválasztás esetén cjJ ha a kiindulási alkaloid-elegy a kívánt komponens arányhoz képest ergokominból, illetve C-8 epimerjéből többletet tartalmaz, akkor a megfelelő 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
