180510. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baromfikolera elleni vakcina előállítására
3 180 510 4 A találmány tárgya tehát eljárás baromfikolera elleni inaktivált vakcina előállítására Pasteurella múltoddá felhasználásával. A találmány értelmében a BKi jelű virulens Pasteurella múltoddá baktériumtörzset (OKI 00183) fehérjeforrásként pepszinnel emésztett máj-extraktummal és inaktivált natív marha- vagy lósavóv§l feldúsított pepton-víz alapú tápközegben 5,9 és 6,1 közötti, előnyösen 6-os pH-érték eléréséig tenyésztjük, a tenyésztés befejeztével a tenyészethez 5—15 t f%, előnyösen 10 t f% steril natív marha- vagy lósavót adunk, a tenyészet pH-értékét valamilyen gyenge bázissal 5 és 8 közötti, előnyösen 7-es értékre állítjuk, a kapott szuszpenzióhoz 30—70 t f%, előnyösen 50 t f% zsíroldó szerves oldószert, előnyösen alkanolt, különösen előnyösen tömény metanolt adunk, a kapott szuszpenziót 0—25°C-on, előnyösen 0—5°C-on 24—'84, előnyösen 24—36 órán át ülepítjük, majd a kivált csapadékot elkülönítjük és fiziológiás konyhasó-oldattal hígítjuk. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott BKi jelű Pasteurella múltoddá törzset az Országos Közegészségügyi Intézetnél 00183 szám alatt letétbe helyeztük. Morfológiai és fiziológiai jellemzői a következők: szokásos baktérium-táptalajon S-telepekben nő, áteső fényben irizál, kékes-zöldes színben játszik, a szokásos anilin-festékekkel festhető, de Gram-negatív baktérium, mikroszkóppal nézve coccús-, illetve cocco-bacillus. Fiziológiai jellemzők: a szokásos cukrok közül a laktózt nem bontja, baromfira és egérre nézve virulens. Virulenciájának fenntartása érdekében a törzset felhasználás előtt egyszer élő állatban kell szaporítani (állat-passzázs). A találmány szerinti eljárást az alábbiakban részletesen ismertetjük. Fermentációs közegként célszerűen az alábbi összetételű tápközeget alkalmazzuk: pepszinnel emésztett sertésmáj 1000 ml jó minőségű pepton 100 g nádcukor 50 g natív marha- vagy lósavó 1000 ml desztillált víz ad 10000 ml a tápközeg pH-értéke 7—7,4 A tenyésztést 5—8 órán át 37°C-on, fermentorban végezzük. A tenyésztés előrehaladását a folyadék zavarosságának mérésével követjük. A tenyésztést akkor fejezzük be, ha a zavarossági mérés értéke a Brown-féle skála 4-es fokának 4—5-szörösével egyenlő. A fermentáció befejeztével a tenyészfolyadékhoz azonnal 5—15 t f%, előnyösen 10 tf% steril natív marha- vagy lósavót adunk védőkolloidként, és ezt követően a tenyészet pH-értékét valamilyen gyenge bázissal azonnal 5 és 8 közötti értékre, legelőnyösebben pH 7-re állítjuk. Gyenge bázisként nátrium- vagy kálium-hidroxidot, vagy nátrium-, illetve kálium-hidrogén-karbonátot alkalmazhatunk. Legelőnyösebben nátrium-hidrogén-karbonátot haszná'unk. A tenyészetet fehérje kicsapáshoz szokásosan alkalmazható zsíroldó oldószerrel inaktiváljuk. Oldószerként célszerűen alkoholt, előnyösen metanolt vagy etanolt, legelőnyösebben tömény, analitikailag tiszta metanolt alkalmazunk. A tenyészet térfogatára számítva 30—70 t f%, előnyösen 50 t f% oldószerrel végezzük az inaktiválást oly módon,, hogy az oldószert előnyösen 0— 40C-on lassan a tenyészethez adjuk. A kapott anyagot 2—3 napig 0—25°C-on, előnyösen 4°C körüli hőmérsékleten ülepítő edényben állni hagyjuk, majd a keletkezett csapadékot dekantálással vagy centrifugálással elválasztjuk a felülúszó résztől. Az ülepítést kívánt esetben többször megismételjük, majd az egyesített csapadékot fiziológiai konyhasó-oldattal hígítjuk. A legelőnyösebb hígítási arány, ha a kezeletlen fermentált tenyészet egyötöd részére hígítjuk a szuszpenziót. A találmány szerinti eljárással előállított vakcina hatékonyságát az alábbi összehasonlító kísérleti eredmények bizonyítják. A vizsgálatokat az Állami Országos Ellenőrző Intézet (ÁOEI) 1975-ben végezte 3 csoportban 10—10 házityúkkal. Az állatokat 3 ml vakcinával, egy héttel később újból 3 ml vakcinával kezelték, majd megfertőzték. Két csoportban az elhullási arány 10— 10 % volt, a harmadikban 30 %. Ezzel szemben a Szukvinnel (baromfikolera elleni ismert vakcina) kezelt összehasonlító csoportban az elhullási arány 70 % volt. A találmány szerinti eljárással előállított vakcina egészséges állatok immunizálására használható, olyan állományokban, ahol heveny baromfikolerás megbetegedésre lehet számítani. Olyan állományokban, ahol már heveny megbetegedések fordulnak elő, a látszólag egészséges állatok immunizálását csak abban az esetben ajánlatos megkísérelni, ha az állatok szigorú elkülönítése megoldható. Az immunitás kifejlődését az állomány egészségügyi állapota befolyásolhatja. Tartási és takarmányozási nehézségek, más természetű betegségek miatt leromlott állatokat ajánlatos pótoltásban részesíteni az immunitás tartósságának biztosítása érdekében. Gyógyszeres kezelés nem befolyásolhatja az immunitás kialakulását. Az előírásnak megfelelően végrehajtott oltás után helyi reakció nem jelentkezik. A vakcina a befecskendezés helyéről egy héten belül nyomtalanul felszívódik, így az esetleges húsraértékesítés alkalmával nem okoz nehézséget. Egészséges állományokban az oltás után legfeljebb némi bágyadtság és étvágytalanság mutatkozik 1— 2 napon át. Tojástermelésre beállított állományokban az oltás után átmeneti tojáshozam csökkenés lehetséges. Az immunizáló oltásokat a betegség behurcolásának közvetlen veszélye esetén, valamint az őszi hónapokban, de a tojástermelésre Beállítás előtt tanácsos elvégezni. A vakcina adagja: 1,5 ml/testsúly kg, de növendék, illetve kistermetű baromfinak min, 2 ml., 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
