180510. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baromfikolera elleni vakcina előállítására
5 180 510 6 növendék kacsának, kifejlett tyúknak 3 ml kifejlett felnőtt kacsának, libának, pulykának 4—6 ml A vakcinát a mellizomba, a szegycsonttal párhuzamosan kell befecskendezni. Az immunitás kifejlődése a vakcinázás után a 8—10. napon kezdődik és a 21. napon éri el tetőfokát. A védettség egyszeri oltás után legalább 3 hónapig tart. Tartóssága lényegesen növelhető, ha az állatokat azonos adaggal egy hónap múlva pótoltásban részesítjük. A találmányt az alábbi példával szemléltetjük. Példa A törzs fenntartása, és a vakcina előállítása A BKt jelű virulens Pasteurella múltoddá baktériumot liofilezett állapotban tároljuk. Vakcinakészítés céljából a liofilezett törzsből egy keveset fiziológiás konyhasó-oldatban felszuszpendálunk, és az így nyert oltóanyaggal házi tyúkot oltunk be. Az állat rendszerint 12 órán belül elpusztul. Sok baktériumot tartalmazó belső szerveiből, főleg májából készítjük a tápközeges tenyészet oltóanyagát. (Tápközegben tenyésztett baktériumot sorozatosan friss tápközegbe átoltani nem lehet, mert a baktérium igen gyorsan elveszítené fokozott virulenciáját. Ezért az állatpasszázsból készítünk 100—100 ml-es tenyészetekben oltóanyagot, és ezt további méretnövelő lépések nélkül a fermentorba visszük. A viszonylag rövid tenyésztési idő szintén a törzs genetikai tulajdonságainak megőrzését célozza.) Az alábbi tápközeget használjuk: Pepszinnel emésztett sertésmáj 1000 ml Richter Pepton 100 g nádcukor 50 g normál ló- vagy marhasavó 1000 ml desztillált víz ad 10 000 ml A törzs 24 órás agar-tenyészeíével 100-—100 ml-es, 6—8 órás korú rázott tenyészeteket készítünk, amelyekkel sterilitási próba és mikroszkópos vizsgálat után a fermentorokban levő tápközeget beoltjuk. Fermentáció közben, 5—6 órán át tartó tenyésztés után mintát veszünk. A mintákat mikroszkópon és csőtáptalajokon történő továbboltatással megvizsgáljuk. Ha a tenyészet megfelelő sűrűségű (zavarossági mérésben a mért érték a Brown-féle skála 4-es fokának 4—5-szörösének felel meg), és a pH érték 6,0-ra esett, a tenyésztést befejezzük. A fermentált tenyészeteket haladéktalanul összegyűjtjük és 10 tf% sterilre szűrt natív lóvagy marhasavót keverünk hozzá. A kapott szuszpenzió pH-ját nátriumhidrogénkarbonátoldattal 7,0 értékre állítjuk. Ezután állandó keverés mellett 50 tf% tömény, előzőleg +4 °C- ra lehűtött vegytiszta metanolt adunk lassan a .szuszpenzióhoz. Az inaktivált tenyészetet 24—36 órán át +4 °C és +10 °C közötti hőmérsékleten megfelelő ülepítő edényben (jénai körte) állni hagyjuk. A csapadékot elválasztjuk a felülúszó résztől, amelyet tovább ülepítünk. Az összegyűj- 1 ött csapadékot szükség esetén centrifugáljuk, utána annyi steril fiziológiás konyhasó-oldattal töltjük fel, hogy a vakcina térfogata az eredeti kezeletlen fermenált tenyészet térfogata 1/5-ének "elel meg. Sterilitási vizsgálatok után kívánt esetben streptomicint vagy más antibiotikumot adhatunk a vakcinához. Az oltóanyagot kiszerelésig + 4 °C-on tároljuk. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás baromfikolera elleni inaktivált vakcina előállítására Pasteurella múltoddá felhasználásával, azzal j ellemezve, hogy a BKi jelű virulens Pasteurella multocida baktériumtörzset (OKI 00183) fehérje-forrásként pepszinnel emésztett máj-extraktummal és inaktivált natív marha- vagy lósavóval feldúsított pepton-víz alapú tápközegben 5,9 és 6,1 közötti, előnyösen 6-os pH érték eléréséig tenyésztjük, a tenyésztés befejeztével a tenyészethez 5—15 tf%, előnyösen 10 tf% steril marha- vagy lósavót adunk, a tenyészet pH-értékét valamilyen gyenge bázissal 5 és 8 közötti, előnyösen 7-es értékre állítjuk, a kapott szuszpenzióhoz 30—70 tf% zsíroldó szerves oldószert, előnyösen alkalnolt, különösen előnyösen tömény metanolt adunk, a kapott szuszpenziót 0—25 °C-on, előnyösen 4 °C-on 24—84, előnyösen 24—36 órán át állni hagyjuk, a kivált csapadékot elválasztjuk, majd fiziológiás konyhasó-oldattal hígítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy gyenge bázisként alkálifém-hidrogén-karbonát-oldatot használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal j e 11 e m ez v e, hogy a kivált, elválasztott csapadékot az eredeti tenyészet térfogatának 1/5 részére hígítjuk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 A kiadásért felel: a Közgazdasági es Jogi Könyvkiadó igazgatója #J. 4íí 988 Petőfi Nyomda, Kecskemét — Felelős vezető ; Ablaka István igazgató ?
