180503. lajstromszámú szabadalom • Eljárás racém-elegyek szelektív radioaktív izotópcsere útján
3 180 503 4 izotópcsere lényege az, hogy az adszorpció által okozott összetétel-eltolódást a sztereoizomerek radioaktív formájának adagolásával állítjuk helyre. Ehhez ugyanazt az adszorpciós összetétel-eltolódást használjuk ki, mint amivel a rarioniaktív racemát összetételét megváltoztattuk. A gyakorlati megvalósítás történhet pl. úgy, hogy a radioinaktiv racemát oldatából az adszorbenst és a 'rajta megkötött anyagot eltávolítjuk, és azonos körülmények között kezelt olyan adszorbenssel pótoljuk, melynek felületén megkötött radioaktív anyag van. Ilyen körülmények közöttt az izotópcsere tetszés szerinti lépés megtétele után sztereoszelektíven játszódik le és nagy radiokémiái tisztaságú termékhez vezet. A radioaktív jelzés mindkét sztereoizomerre megvalósítható. Nem szükségszerű, hogy az adszorpció heterogén rendszerben, fázisok hatásfelületén játszódjék le. Az eljárás megvalósítható kolloid oldatban is, a gyógyszer molekuláinak valamely makromolekula (pl. fehérje) felületén bekövetkező megkötődése útján. Az adszorbens elengedhetetlen tulajdonsága a királis szerkezet, aminek következménye, a sztereoszelektív adszorpció. Fentiek alapján a találmány értelmében úgy valósítjuk meg racém elegyek szelektív 'radioaktív jelzését, hogy az adott esetben radioaktív racém elegy oldatát királis szerkezetű adszorbenssel hozzuk össze, az oldatot és az adszorbenst egymástól elválasztjuk, majd valamelyik sztereoizomer radioaktív formájának — akár oldatban, akár adszorbensen való adagolásával a racém elegy izometjeinek arányát ismét l:l-re állítjuk be, és az elválasztást és adagolást addig ismételjük, amíg az egyik sztereoizomer radioaktív formája az elegyben feldúsul. Amennyiben mód van arra, hogy a királis szerkezetű adszorbenst heterogén fázisban alkalmazzuk, az elválasztás művelete egyszerűbbé válik. Ha viszont érre nincs lehetőség, az adszorbens kolloid részecske formájában is felhasználható. A találmány szerinti eljárásra előnyösen alkalmazhatók természetes eredetű (fehérjék, szénhidrátok, nukleinsavak), vagy félszintetikus anyagok, ill. ezek kombinációi, 2—40 °C közötti hőmérséklet tartományban, 0,01—2,0 ionerősségű vizes oldatban, 4—9 pH intervallumban. A kívánt konverzió eléréséhez az egyszeri adszorpcióban bekövetkező kis mértékű szelektív jelzés több egymást követő lépésben, szakaszosan, ill. stacionárius körülmények között folyamatos üzemű szűrési, ultraszűrési, vagy centrifugálási módszerrel tehető teljessé. Ha az .adszorbens immobiliizált állapotban is megőrzi királis sajátosságait, az eljárás előnyösen valósítható meg úgy, hogy az adszorbenst oszlopba töltjük, és az elválasztást kromatográfiás módszerrel végezzük. Az eljárás a fentiekben elmondottak alapján számos változatban megvalósítható. A részletesebb bemutatás céljára szolgálnak az alábbi példák, amelyekre — természetesen — a találmány nem korlátozódik. 5 1. példa: Oxazepam acetát sztereoszelektív jelzését egyszerű ultraszű'rési lépések kombinációival végezzük. Ezen vegyület d-enantiomerje (jobbra forgató) kb. 10-szer jobban kötődik, mint 10 c»ü„ az l enantiomerje (balra forgató). Az a =----ca disszociáció fokot radioaktivitás-méréssel határozzuk meg. Az első lépésben 7,3 • 10“° M radioaktív racém oxazepám acetátot és 1,05 • 10 1 ^ M humán szérum albumint tartalmazó oldatot szűrünk A szűrletből a, = 0,35 disszociáció fok mérhető, amely = 0,59 és xd = 0,12 diszszociáció fokok számtani közepe, a szűrlet tehát 83% l és 17% d-enantiomert tartalmaz ^ azonos fajlagos aktivitással. Teljesen azonos szűrést végzünk inaktív racemáttal is. A további lépésekben az aktív szűrletet az inaktív maradékkal, az inaktív szűrletet az aktív maradékkal egyesítjük, mindkét cellában visszaállítva az eredeti raoém összetételt, de megváltoztatva a fajlagos aktivitásokat, és mindkettőt leszűrjük, a disszociáció fokot aktivitás méréssel meghatározzuk. A változatlan összetételnek megfelelő a, = 0,35 érték az aktív szürlet 3^ ágon nő, az aktív maradék ágon csökken, a művelet további ismétléseivel közelíti aj ill. xd, disszociáció fokok értékét. A táblázatban négy lépés eredményt mutatja be: 35 disszociáció fok (a) lépés szűrlet ág maradék ág 1 0,35 0,35 2 0,50 0,24 3 0,59 0,21 4 0,57 0,17 Megállapítható, hogy szűrlet ágon három lé- 45 pés után a 83% l + 17% d összetétel mellett a rádioaktivitás teljesen a kevésbé kötődő 1 —enantdomerhez tartozik, a fajlagos aktivitása az eredetinek kb. 14%-a. Maradék ágon a negyedik lépés után a oeMban tökéletes szű- 50 rés esetén 83% d- és 17%í -enantiomer van, a radioaktivitás kb 90%-foan a d-hez tartozik, a fajlagos aktivitás kb. a kiindulásinak 63%-a, az -hez tartozik az aktivitás kb. 10%-a, a fajlagos aktivitás az eredetinek kb 7%-a. 55 A termékek optikai tisztasága CD-módszerrel meghatározható, az aktivitás megoszlásának független módzerrel történő ellenőrzése humán szérum albumin-Sepharose oszlopon felvett radiokromatogram alapján lehetséges. 60 2. példa : 600 ml fiziológiás sóoldatban feloldunk 20 mg C—14 (±) oxazepámhemiszukcinátot (fajlagos aktivitás: 20 mCi'mmol). Az oldathoz 4 g 65 immobilizált humán szérumalbumint adagolunk 2
