180484. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil, nagy mértékben immunogén, egy/vagy két jellemzőjében mutált, legyengített salmonella-baktérium mutánsok előállítására élő oltóanyagokhoz
19 180 484 20 IX. táblázat Salmonella cholerae-suis mutáns immunogenitása Terhelés i. p. 105 Salmonella i. p. immunizálás, 10* vac* eholerae- csíra +/30 egér 20 nap suis mu- elteltével esíia tanroIc ^ ransoK J()4 1()6 ]()G 1()7 1()8 1()9 ^ 20 nap után R-törzs 11 15 15 24 30 22/55 431/256 R-törzs 2 17 25/41 plusz pur[ade]“4 Vad törzs./. ./. 0 30/30 kontroll 30 i. p. ~ 10-’r> 30/30 (*: elhullott állatok) (N: összes állat száma) A fenti táblázatban összefoglalt adatok bizonyítják, hogy — a 431/256 kiindulási mutáns esetében, amelynek Td’)r)0 értéke ~105>2, 104 i. p. esíraszámnál még az egerek egyharmada elhull; az immunizálást túlélő egerek körülbelül 41%-a van védve >100 LD5# vadtörzs-terheléssel szemben; — a 431/261 oltótörzs, amelynek LD50 értéke ~10", csupán i. p. 108 csíra esetében hullanak még el egyes állatok toxikus fertőzés következtében ; a toxikus fertőzés határ-tartományában töiténő egyszeri immunizálással a várakozásnak megfelelően a túlélő egerek 50%-a van védve letális mértékű vadtörzs-terheléssel szemben, míg a < 107 csírával i. p. történő immunizálás nem ad kielégítő védelmet a homolog kS-alak i vadtörzs általi fertőzéssel szemben. Az S. cholerae-suis R-Dessau 431/256 pur[ade] “ 1 illetőleg 431/261 kétjellemzős oltótörzsnek az cgérmodellen nem kielégítően kimutatható immunogonitása azonban csupán a rendkívül magas >100 LD50 terhelésre vonatkozik. Sertésen ~LD5o terhelés esetén igen jó védőhatás mutatkozik, amint ezt a X. táblázat adatai szemléltetik. X. táblázat Inaktivált vakcinával elért eredmények Immunizálási variánsok Inaktivált Kiindulási 431/261 mu- Kontroll vakcina törzs 431/256 táns törzs 431/034 kétszer egyszer pa- egyszer pa- törzs egyszer parenterá- renterálisan renterálisan orálisan lisan 1—2-109 5-107 5-109 5-1010 5-10I0össz- élő csíra élő csíra élő csíra csíraszám +/N_____________ _____________ 6+/20 6+/25 ” 8+/41 3+/97 62+/123 (* : elhullott állatok) (N: összes állat száma) A táblázatban háromhetes szopós malacok S. cholerae-suis 431/256 [ade] “4 illetőleg 431/261 kétjellemzős mutánssal történő immunizálása és három héttel ezután virulens S. cholerae-suis 431/ 034 törzzsel orális úton történő fertőzés során kapott eredményeket mutatunk be : Az oltótörzs elválasztása vadtörzsektől Az oltótörzsnek az élő oltóanyag alkalmazása esetén szükséges és bakteriológiai-szerológiai laboratóriumokban könnyen keresztülvihető elválasztását a homolog, más eredetű vadtörzsektől a XI. táblázat adatai mutatják; XI. táblázat Oltótörzs elválasztása Más Más , törzs- . Oltó- eredetű eredetű Purmrevertörzs vad- R-mu- . . jeli. törzs táns -, - „ R-alak + 0 + 0 + Purin-dependencia +00 + 0 Amint a fenti táblázat adatai mutatják, mindkét jellemzőnek (R-alak és purin-dependencia), illetőleg a purin-dependencia genetikai jellemzőnek egymagában a meghatározása lehetővé teszi az oltótörzsnek a homolog vadtörzsektől történő elválasztását. Az oltótörzs egyik jellemzője szempontjából történő, csupán elméletileg szóbajövő revertálás csalt az R—-S reverzió esetében határozható meg. A purin-prototrófiához való revertánsok a nagyobb számban spontán fellépő R-alakoktól szerológiai úton és egy differenciált lizis-spektrum alapján különíthatők el. Csupán az oltótörzs R-struktúrája és a spontán fellépő R-alakok közötti igen ritka megegyezés esetén bizonyul a megkülönböztetés lehetetlennek. 3. példa A fent leírt oltótörzsek purin-prototiófiához (virulenciához) való reverziója gyakoriságának a meghatározása és a purin-dependencia kimutatása A vizsgálandó oltótörzs 109 illetőleg 107 csíráját egy minimál-tápközegie visszük; egy teljesen helyettesített minimál-tápközegben kontroli-oltást végzünk és mindkettőt 48 óra hosszat inkubáljuk 37 °C hőmérsékleten. Ezután meghatározzuk a reverzió-gyakoriságot ; ennek az alábbi értékeket kellene mutatnia: — egyjellemzős mutánsok esetében <10“8 (lásd fentebb) — kétjellemzős mutánsok esetében <10“7 (lásd fentebb) ; ugyancsak meghatározzuk a mutánsok purin-dependenciáját. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
