180484. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil, nagy mértékben immunogén, egy/vagy két jellemzőjében mutált, legyengített salmonella-baktérium mutánsok előállítására élő oltóanyagokhoz
21 180 484 22 4. példa Az élő oltóanyag előállítása céljából a törzseket félszintetikus tápközegen, 37 °C hőmérsékleten fermentorban tenyésztjük a logaritmikus növekedési fázis befejeződéséig. Ezután a kapott kultúrát liofilizáljuk. Példa Salmonella cholerae-suis élő oltóanyag előállítására : A Salmonella cholerae-suis 431—261 törzset egy 70 liter Salmonella-tápközeget (összetételt a 115 919 sz. NDK gazdasági szabadalom leírása szerint : 2% laktalbumin-hidrolizátum és 0,5% glükóz) tartalmazó feimentorban tenyésztjük. A tápközeget elő- 15 zetesen derítjük, majd sterilre szűrjük és 7 liter inokulum-kulturát (amelyet 37 °C hőmérsékleten történő 16 órai inkubálással állítottunk elő), valamint 35 ml szilikon-habgátlót (Antaphron NE 30, VEB Chemiewerk Nünchritz DDR) adunk hozzá. 20 A fermentációt 37 °C hőmérsékleten folytatjuk, percenként 200 fordulattal történő keveréssel és 0,06 m3 levegő/óra/liter levegőátbocsátással. A stacioner fázis elérésekor a fermentációt megszakítjuk és a közeg pH-értékét 20%-os vizes nátrium-hidroxid-oldattal 7,5-ra állítjuk be. A kapott baktéiium-kultúrához a liofilizálás céljából stabilizator! adunk (stabilizátor: szacharóz és normál szérűim elegye). Az oltóanyagot palackokba töltjük és gyorsfagyasztási eljárással megfagyasztjuk, liofilizáló berendezésben megszárítjuk, majd nitrogénnel átöblítjük a liofilizált kultúrát tartalmazó palackokat. A találmány szerinti eljárással előállított élő oltóanyagot általában egyszeri orális vagy parenteiális adagokban (1.108—5.103 élő csírával) adjuk az imunizálandó haszonállatoknak. A mindenkori immunológiai előfeltételeknek és epidemiológiai, illetőleg epizootiológiai követelményeknek megfelelően kidolgozott immunizálási program alkalmazásával lényegesen elősegíthetjük a leküzdendő fertőzéses megbetegedések természetes terjedésének 45 megakadályozását. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás stabil, nagy mértékben immunogén, egy vagy két jellemzőjében mutált és ilyen formá-5 ban legyengített Salmonella-baktérium mutáns-ok előállítására élő oltóanyagokhoz vadtörzsekből vagy nagy mértékben immunogén, egy jellemzőjében mutálva szaporodást nem korlátozóan legyengített törzsekből, azzal jellemezve, hogy 10 szaporodást nem korlátozó legyengítő jellemzőként önmagában ismert módon előnyösen N-metil-N’-nitrozo-guanidines kezeléssel lefolytatott mutogenezissel purin-vázás vegyidet dependeneiát viszünk be a Salmonella-törzsbe. 2. Az igény 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a mutánsszelekcióhoz különféle purin-származékokat, mint adenint, guanint, hipoxantint, xantint vagy inozint alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy egy jellemzőjében mutált oHótörzsként az alább felsorolt vadtörzsekből szelektált purinvázas vegyület-dependens kiónokat alkalmazunk, amelyeknek a 25 prototrófiához való reverzió-gyakorisága laboratóriumi körülmények között legfeljebb 10~8: Salmonella dublin pur[ade] “16 (IMET B 421) Salmonella typhi-murium pur[ade] “81 (IMET B 422) 30 Salmonella cholerae-suis pur[ade] “27 (IMET B 423) . 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy két jellemzőben mutált oltótörzsként az alább felsorolt, 35 nagy mértékben immunogén, ko-mutáció útján, illetőleg más okokból legyengített, egy jellemzőben változott mutánsokból szelektált purinvázas vegyület-dependens kiónokat alkalmazunk : Salmonella dublin pur[ade]~tia~ AF 242324 a 40 (IMET B 421) Salmonella dublin met_91 pur[ade]”23 (IMET B 424) Salmonella tvphi-murium his~155 pur[ade]_4 (IMET B 427) Salmonella cholerae-suis Tt-Dessau pur[ade]~4 (IMET B 428). 2 ábra A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 84 84. 34 KI7 Petőfi Nyomda, Kecskemét — Felelős vezető: Ablaka István Igazgató 11
