180484. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil, nagy mértékben immunogén, egy/vagy két jellemzőjében mutált, legyengített salmonella-baktérium mutánsok előállítására élő oltóanyagokhoz
17 180 484 18 hatás, illetőleg a 2. jellemző purin-prototrop re ver - táns virulencia szempontjából való viselkedése alapján — egér-modellen mutattuk ki (lásd a VII. táblázatot). A VII. táblázatban az S. typhi-murinum törzs egyetlen legyengítő jellemzője, illetőleg két egymástól független legyengítő jellemzőjű mutánsának legyengítettségét és immunogenitását, valamint a kétjellemzős mutánsból purin-prototi ófiához való reverzió útján keletkezett revertánsnak a virulencia szempontjából való viselkedését mutatjuk be. VII. táblázat Salmonella typhi-murium mutáns immunogenitása Terhelés S. typhi-murium mutánsok i. p. immunizálás, 10* csíra +/N egér 20 nap elteltével 105 106 107 108 í. p. :>ioo LDso vadtörzs +/N egér his_165 his-155 4/30 13/30 23/30 27/30 1/53 plus pur [ade]-4 revertáns 0/20 0/20 0/20 8/20 3/72 his_165 pur [ade]+4 2/30 7/30 22/30 29/30 nem vizsgáltuk vadtörzskontroll 19/20 20/20 (* : elhullott állatok) (N : összes állat száma) Amint a fenti táblázat adatai mutatják, az egyes mutáns-törzsekkel történő i. p. immunizálás esetén az alábbi mértékű elhullás következik be: — S-alakú mutáns his~155 (LD50 ~106>7 csíra): csak egyes állatok 105 csíraszámnál; — his_155 pur[adé] ~4 kétjellemzős mutáns (LD60>108 csíra): csak 108 csíia esetén mutatkozik egér-elhullás. Az i. p. immunizálás következményeként teljes immunitás mutatkozik >100 LT)50 vadtörzs-fertőzésael szemben az alábbi módon az egyes mutánstörzseknél : — S-alakú mutáns his~155: a túlélő egerek >95%ánál; — his“155 pur[ade] _4 két jellemzős mutáns: ugyancsak a túlélő egerek >90%-ánál, a 105 csíraszámig menően immunizált állatok esetében. Figyelemre méltónak látszik, hogy az oltótörzs már olyan csíraszámokkal szolid immunitást vált ki, amelyeket a kísérleti állatként alkalmazott egerek teljes mértékben elviselnek és mely legalább 3 logaritmikus fokozattal a toxikus fertőzést okozó határérték alatt van. Az oltótörzsnek a purin-prototrófiához való revertánsa (his~155 pur[ade] _4->his,_155pur[ade]+4) ugyanolyan LD50 értéket mutat, mint a kiindulási törzs his~155 S-alakja; ez á his"155 pur[ade] "4 oltótörzs stabilitását és az I. jellemzőnek (S-alak, his~155; legyengítés ko-mutációval) az oltótörzsben való jelenlétét bizonyítja. Az oltótörzs elválasztása vadtörzsektől Az élő oltóanyagok esetében szükséges az oltó- 5 törzsnek a homolog vadtörzsektől való, minden bakteriológiai-szerológiai laboratóriumban könnyen végrehajtható elkülönítése. Ennek a feltételnek a kielégülését a VIII. táblázat szemlélteti, amely az S. typhi-murium his~ 155 pur[ade] “4 oltótörzs 10 esetében mutatja az oltótörzsnek a más eredetű vadtörzsektől, valamint az azonosítási jellemzők egyike szempontjából való revertánsoktól fennálló elkülöníthet őségét : 15 VIII. táblázat Salmonella typhi-murium elkülönítése 20 25 Jellemző Oltótörzs Más eredetű vad törzs Az oltótörzs revertánsai metionin purin jellemző szempontjából Hisztidin--auxotrófia + 0 0 + Purindependeneia + 0 + 0 30 Amint a fenti táblázat adataiból látható, mindkét jellemzőnek, tehát a hisztidin-auxotrófiának és a purin-dependenciának, illetőleg a két genetikai jellemző csupán egyikének a meghatározása már lehetővé teszi az oltótörzsnek a homolog vadtörzsek -35 tői való elkülönítését. 2c. példa Salmonella cholerae-suis R-Dessau 431/256 pur [ade] -4 illetőleg 431/261 Az 1. jellemzőhöz: 49 Ez a szomatikus antigén mutációja az R-alakhoz (i. p. egéren ~ 105>2), amelynek reverzió-gyakorisága <10~10. Az alkalmazott R-mutánsnak szövet-perziszteneiaképessége van sertés haszonállatnál; elegendő immunogenitással és erősen csökkentett 45 vii'ulenciával rendelkezik malacokon. A 2. jellemzőhöz: Ez jellemző a purinnal szembeni függőség; reverziógyakorisága ~-8 A két jellemzőt kapcsoltan mutató mutáns 50 (R-alak+purin-dependencia) i. p. LD50 értéke egéren: ~109 csíra. Az S. cholerae-suis R-Dessau 431/256 pur[ade]~4 illetőleg 431/261 oltótörzs esetében mindkét jellemző egyidejű reverziójának gyakorisága elméletileg 55 <10-18 nagyságrendű. Az oltótörzsnek, valamint az R-egyjellernzős kiindulási mutánsnak az egér-modellen mutatott legyengítet.tségét és immunitását a IX. táblázat szemlélteti. 60 Ebben a táblázatban az egyjellemzős (R-alak 431/256) S. cholerae-suis mutánsnak valamint a két egymástól független legyengítő jellemzőjű(R-alak + purin-dependencia) kétjellemzős oltótörzs-mutánsnak a legyengítettségót és immunogenitását szem-65 léltetjük: 9
