180484. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil, nagy mértékben immunogén, egy/vagy két jellemzőjében mutált, legyengített salmonella-baktérium mutánsok előállítására élő oltóanyagokhoz
7 180 484 8 purintól függő mutáns-klón szelektálása útján az egyjellemzős S. typhi-muiium S-alak his_155 mutánsból; Legyengítés: Ko-mutáeió útján; LDS0 i. p. egéren: ~106’7 egyjellemzős mutánscsíra ; a virulencíához való reverzió gyakorisága ■ <10“7 (1. alább). — Salmonella cholerae-suis R—Dessau pur [ade]-4 AF 23 20 10 illetőleg 431/261; előállítva egy purintól függő klón szelekciója útján az S. cholerae-suis R-Dessau 431/256 egyjellemzős mutánsból ; Legyengítés : R-alak-antigénnel ; LD60 i. p. egéren: 105’2 R-mutáns-csíra; a virulens S-alakhoz való reverzió gyakorisága: SIÓ-1". Két egymástól független legyengítő jellemzőjú, nagy mértékben immunogén kétjellemzős mutánshoz juthatunk oly módon is, hogy egy purintól függő egyjellemzős mutánsba egy második, valamely más okból legyengítő és a szaporodásban nem gátolt mutánst építünk be. Ennek példájaként az alábbi törzset említhetjük; — Salmonella dublin (81) ade_tia_ AF 24 23 24 a előállítva egy tiamintól függő klón szelekciója útján az egyjellemzős Salmonella dublin (81) ade“ mutáns-törzsből; LD50 i. p. egéren : 101>z vadtörzs-csíra LD60 i. p. egéren: 10s>5 egyjellemzős mutánscsíra LD60 i. p. egéren: 10“'7 kétjellemzős mutánscsíra Laboratóriumi megjelölés Törzs-szám IMET-sz. Salmonella dublin pur [ade]- tia-Salmonella dublin met-91 AF 24 23 24a B 471 pur [ade]-23 Salm, typhi-murium his-155 AF 24 23 26 B 424 pur [ade]-4 S. cholerae-suis R-Dessau AF 22 10 52 B 427 pur [ade]-4 AF 23 20 10 ill. 431/261 B 428 A találmány szerinti eljárás, illetőleg a fentebb közelebbről jellemzett oltótörzsek a purin-jellemzőre vonatkoztatva az alábbi előnyöket, mutatják, illetőleg az alábbi követelményeket elégítik ki : — a fenotipikus megjelenési kép és a legyengítet tség között korreláció áll fenn; — a virulencíához való reverzió gyakorisága közvetlen laboratóriumi módszerekkel igen szelektíven meghatározható ; — a Specifikus gazdaállatban való szaporodási képesség a klinikai küszöbérték alatt van és a szövetben időbe! ileg korlátozott antigén-perzisztencia mutatkozik, ami a terhelhető immunitás kiváltásának előfeltételé ; — a törzsek alkalmasak stabil, legyengített mutánsoknak nagy mértékben immunogén élő oltóanyagok céljaira történő előállítására. A találmány szerinti probléma megoldás igen meglepő, mert egy 25 éve fennálló tudományos előítélet alapján a purintól való függőségre történő mutációt túlságosan gyenge immunogenitású oltótörzsek előállításához vezető szaporodást korlátozó legyengítő jellemzőnek tartották, például az alábbi irodalmi közlések szerint : — Salmonella typhi-murium és Salmonella typhi esetében: Raeon és munkatársai: Brit. J. Exper. Path. 32, 85—96 (1951); Braun: Bakteralni genetika 191. old., Academia Praha 1968; Garber; The American Naturalist XC 183—194 (1956); Gowen és munkatársai: Genetics 38, 531—549 (1953); Mendel-Herzberg, J. Infect. Dis. 110, 192—203 (1962); Tkacsenko: Zs. Mikrobiol. (Moszkva) 1967/6, 21—25; 1967/10, 102—105: 1969/10, 80—86; és ezért nem ismerték fel az ebből eredő lehetőségeket : — Elkina és munkatársai: Zs. Mikrobio). (Moszkva) 1971/11, 10—13; Likhoded és Shuster; Zsehr. Ges. Hyg. 22, (1976) 1. pótfüzet, amelyek alapján ennek a jellemzőnek szaporodást nem gátlóan legyengített, nagy mértékben immunogén mutánsok bakteriális élő oltóanyagok előállítására történő felhasználása megvalósítható. A fenti, általánosan elismert tudományos véleménnyel, illetőleg tévesen értelmezett irodalmi közlésekkel ellentétben a találmány értelmében lehetségesnek bizonyult az ilyen mutáns-típus megmaradt in vivo szaporodóképességének és in vívó perzisztenciájának a kimutatása és hasznosítása : — a purin-dependens mutánsok 10% egér-szérummal helyettesített minimál-közegen a növekedés nyomait mutat ják : — a purin-dependens Salmonella-mutánsok egéren mutatott innnunogenitásának az I. táblázatban összefoglalt adatai közvetve bizonyítják a töizs in vivo szaporodását és in vivo perzisztenciáját. I. Táblázat 8 purin-dependens Salmonella mutáns legyengítése és immunogonitása Reverzió-gyakoriság: 108 mutáns-csíra. 6—8 egyedi kísérlet összesítése, egér-modellen N = összes állat; + = elhullott állatok száma Terhelés Salmonella Immunizálás a 10. napon purfade]i. p. 105 csíra i. p. vadmutánsok +/N % + 100 ld60 +/N törzs Of + /o S. dublin 16 14/100 14 20/86 23 S. typhi-murium A 13 5/70 7 24/65 37 A 14 0/70 0 7/70 10 81 1/60 2 2/59 4 307 3/90 4 17/87 20 S. choiera-suis 1 0/50 0 16/50 32 27 0/40 0 6/40 15 30 6/50 12 10/44 23 29/530 6 102/501 20 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
