180484. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil, nagy mértékben immunogén, egy/vagy két jellemzőjében mutált, legyengített salmonella-baktérium mutánsok előállítására élő oltóanyagokhoz

5

180 484

6

rációs idő körülményes meghatározása alapján választhatók el ;

b) a mutációknak bizonyos riboszóma-fehérjék génjei tekintetében nyilván nem azonos volta következtében a törzsek különböző virulenciájú és különböző immunogenitású kiónok egész spektrumára esnek szét [Blatz és Knoll: Leipzig, Karl—Marx—Universität, disszertáció (1974), 92. old.];

c) az egér-modellcn immunogenitás rendszerint csak viszonylag magas maradék-virulencia esetén mutatható ki [Blatz és Knoll, i. m.].

A találmány célkitűzése egy olyan definiált genetikai jellemző (marker) bevezetése, illetőleg alkalmazása volt,

— amelynél, a fenotípus korrelációban áll a lcgyengítéssel ;

— amelynél a virulenciához való reverzió gyakorisága közvetlen laboratóriumi módszerekkel, igen szelektíven meghatározható ;

— amely alkalmas stabil, szaporodást nem gátlóan legyengített baktérium-mutánsoknak jól elviselhető élő oltóanyagok céljaira való nagyipari módszerek figyelembevételével történő előállítására ;

— amelynél a genetikai defektus időben korlátozott szaporodást enged meg a haszonállatban illetőleg a specifikus gazda-szervezetben, úgy, hogy egyjellemzős mutánsok (1. alább) esetén egyszeri oltással, illetőleg kettős jellemzőjű mutánsok (1. alább) esetén rendszerint egyszeri oltással elérhető legyen a terhelhető immunitáshoz szükséges antigén-mennyiség a gazda-szövetben és kielégítő, de korlátozott antigén-perzisztencia legyen elérhető, ami előfeltétele a ciklusos fertőzések elleni védelem főtényezőjét képező celluláris immunitás kiváltásának [Collins: Bacteriol.Rev. 38 371—402 (1974)];

— amely megengedi, hogy a vele ellátott oltótörzsek mindenkor, minimális ráfordítással biztonságosan elkülöníthetők legyenek az endémiásan/enzootikusan vagy epidémiásan/epizootikusan előforduló vad törzsektől.

A találmány a következő felismeréseken alapul :

1. élő oltóanyagok előállítására alkalmas, szaporodásban nem gátolt legyengített baktériummutánsok, amelyek nem szelektív gyakorlati körülmények között stabilnak bizonyulnak, oly módon nyerhetők, hogy vad törzsekből 10“8-nál nem nagyobb reverzió-gyakoriságú, purintól mutánsokat izolálunk egyjellemzős törzsekként;

2. élő oltóanyagok előállítására alkalmas, szaporodásban nem gátolt, stabil, két egymástól független legyengítő jellemzőjű baktérium-mutánsok oly módon nyerhetők, hogy a purintól való függőséget építjük be második szaporodást nem gátló jellemzőként valamely mái okból szaporodást nem gátlóan legyingített, nagy mértékben inununogén egyjellemzős mutánsba; minthogy az ilyen kétjellemzős mutánsoknál a két egymástól függetlenül legyengítő jellemzőben való egyidejű spontán reverzió a gyakoriságok hatványozódása folytán ( > 10“7 ■ > 10“7 = > 10“l4) elenyésző mértékű, az ilyen oltótörzsek a nem szelektív gyakorlati körülmények között teljes stabilitást mutatnak;

3. az ilyen fajta mutánsok a fenotípus alapján felmérhető és genetikus hatással legyengítő jellemző alapján in vitro, szerológiai, biokémiai és lizotipiai rutin-módszerekkel elegendő biztonsággal elhatárolhatók a virulens vad törzsektől ;

4. az ilyen mutánsok fermentációs úton tenyészthetők és liofilizálással elegendő hosszú ideig tartósíthatók ;

5. az ilyen mutánsokból előállított élő oltóanyagok epidemiológiai és epizootiológiai kockázat nélkül alkalmazhatók és immunogén hatásúak a nagy haszonállat-populációkban.

Egyjellemzős mutánsok: purin-függőségnek az olyan vad törzsekbe való bevezetése, amelyeknél a prototrófiához (virulenciához) való reverzió gyakorisága ki nem mutathatóan csekély, illetőleg <10-8, például az alább felsorolt e találmány szerinti egyjellemzős mutánsokhoz vezet, amelynek legyengítettségük és egéren mutatott nagy7 irnmunogenitásuk (lásd az I. és II. táblázatot) folytán potenciális oltótörzsekként alkalmazhatók; ezeket a törzseket a Német Demokratikus Köztársaság jénai Központi Mikrobiológiai és Kíséileti Terápiái Intézeténél (Zentralinstitut für Mikrobiologie und experimentelle Therapie, Jena; IMET) letétbe helyeztük az alább megoldott IMET-számok alatt :

Laboratóriumi megjelölés

Törzs-szám

ZIMET-szám

Salm. dublin pur[ade]“16

AF 24 23 24

B 421

S. typhi-inurium pur

[ade]“81

AF 22 10 54

B 422

S. cholera-suis pur [ade]“27

AF 23 20 19

B 423

Kétjellemzős mutánsok: a stabilitási követelményeknek megfelelő < 10“7 reverzió-gyakoriságú puritán-függőségnek valamely7 egyéb okból szaporodást nem gátlóan legyengített, nagy mértékben immunogén egyjellemzős mutánsba való beépítése például a találmány7 szerinti, alább felsorolt, két egymástól független legyengítő jellemzőjű kétjellemzős mutánshoz vezet, amelyek stabil legyengítettségük és egéren, valamint haszonállatokon mutatott immunogenitásuk folytán alkalmasak lehetnek oltótörzsként és amelyeket szintén letétbe helyeztünk az NDK Központi Mikrobiológiai és Kísérleti Terápiái Intézeténél (IMET) ;

— Salmonella dublin met“91 pur [ade]“23 AF 24 23 26 előállítva egy purintól függő klón szelektálása útján az egyjellemzős S. dublin S-alak, met“91 mutánsból; legyengítés: Ko-mutáció útján, LD50 i. p. egéren: ~ KJ6’5 egyjellemzős mutánscsíra ; a virulenciához való reverzió gyakorisága : <10“7 (1. alább).-—Salmonella ty7phi-murim his“155 pur [ade]“4 AF 22 10 52 (lásd VII. táblázat) előállítva egy7

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

3