180285. lajstromszámú szabadalom • Eljárás különböző poliszacharidéterek új aminoszármazékainak előállítására affinitáskromatográfia kárkészítés céljából
180.285 4 -on, ma3ci különböző hőmérsékletekre melegítve 2 órát rázattuk. A minták feldolgozása az 1.1. pontban leírtak szerint történt. Az 5/3* ábrán a bevezetett aminocsoport tartalom per g száraz gól értékeiket ábrázoltuk a hőmérséklet függvényében. 1*3- Az epiklórhidrin koncentráció optimálása. 3 g leazivatva szárított agarózt 6,5 ml 0,25 N nátriumhidroxid oldatban szusznendáltunk és különböző mennyiségű epiklórhidrln hozzáadásával 2 órát szobahőfokon rázattak. Az 5/4. ábrán a gélen kötött aminöcsoport tartalmat //umol per gramm száraz gól/ ábrázoltuk a reakcióelegy epiklórnidrin koncentráció jának függvényében. 1.4. A reakcióidő optimálása. 5 g leazivatva szárított agarózt 6,5 ml 0,25 H nátriunhidroxid oldatban azuszpendáltuk és 0,325 ml epiklórhidrin hozzáadása után szobahőfokon rázattuk különböző ideig. Az 5/5* ábrán bemutatjuk ezen kis ér lets or ozat eredményeit. 2./ Az 1,4-butándiolűiglicidiléterrel történő aktiválás körülményeinek optimálásakor felhasználtuk Sundberg és Porath eredményeit, ügy találtuk, hogy ha az általuk alkalmazott epoxid koncentrációt negyedére, az aktiválás idejét szintén negyedére, raig a lu^koncentrációt 0,5 M-ra csökkentjük, úgy teljesíthetők célkitűzéseink, és egy kíméletes aktiválási eljárást kapunk. Az aktivált gél feldolgozása az 1.1. pontban leirtak szerint történt. A módszereünklcel szintetizálható amino végcsoportu különböző hosszúságú karok a már ismert módszerekkel továbbalakithatók, tetszőleges hosszúságú és különböző funkciós csoportú /karboxil, tiol stb./ karokká /P. Cuatrecasas /1970/ J. Biol.Ohem. 245, 3059-5065/. Az aktiválási eljárás gyors, egyszerű és jól reprodukálható /l. táblázat/* Az aktiválás során a gél eredeti szerkezete lényegében megőrizhető, a keresztkötések száma minimális. Ennek vizsgálatát oly módon végeztük, hogy a különböző módszerekkel készült géleket 75°C-os vízfürdőn 50%-os ecetsavban hidrolizáltattuk es mértük az oldódási időket. Ezen idők a keresztkötések mennyiségével arányosan nőnek. Szubsztituálatlan Sephaxose 4B-t használtunk kontroll anyagként /2. táblázat/. Azt tapasztaltuk, hogy az általunk készített gélek a kontrollal azonos idők alatt maradéktalanul feloldódtak, mig a brómeiános aktiválással és a már említett szerzők módszerével készitett gélek még 10 óra eltelte után is lényegében változatlanul maradtak vissza. Ezen kísérlettel egyszerűen bizonyítottuk, hogy a módszereünkkel végzett karbevezetés igen kíméletes. Az eljárás, a megfelelő szárazanyag sulyok figyelembevételével alkalmas egyéb poliazacharidokba, pl. dextránba és cellulózba is amino végcsoportu karok bevezetésére /3* táblázat/. Az oltalmazni kívánt eljárást,*liletve alkalmazásait részletesen az 1-8. példában ismertetjük. 1. példa Karbevitel agarózba epiklórhidrinneli
