180285. lajstromszámú szabadalom • Eljárás különböző poliszacharidéterek új aminoszármazékainak előállítására affinitáskromatográfia kárkészítés céljából
180.285 szerkőzetét, a magas hőfokon /60°C/ végzett aktiválás során Már a gélc-zemcsék jelentős károsodása /"megolvadása"/ Is megfigyelhető. Azt a meglelő felfedezést tettük, hogy a reakciókörülmények megváltoztatásával eme hátrányok kiküszöbölhetőek. Széleskörű kísérleteket végeztünk az alkalmas epoxlvegyületekkel, nevezetesen az eplklórhidrlnnél és 1,A-butandioldiglicldlléterrel való aktiválás körülményeinek optimálására. Ily módon olyan,különböző hosszúságú korokat nyerhetünk, melyeket stabil éter kötésen keresztül vezettünk be a hordozóba, az aktiválás 3orán pedig nem keletkeznek anioncserélő csoportok, a kar hidrofil karakterű, Így az aspeciíikus fehér jeretenció is csökkenthető. A reakciókörülmények helyes megválasztásával a gél eredeti szerkezete csak kismértékben módosul, és Így olyan mátrixot kapunk, mely kiválóan alkalmas célkitűzéseink elérésére. A módszer lényege, hogy az epoxlvegyületekkel /1,4-butándioldlglicidiléter vagy eplklórhidrin/ aktiváljuk az - M -OH - polimer mátrixot. A következő lépésben az izolált termékeket /III., V. /általános képletü ammóniával reagáltatjuk. Ekkor a /III/ általános kéçletü vegyület terminális epoxid csoportjára ammónia addiclonálodik és igy képződik a /VI/ általános képletü vegyület, mely már primer amino-csoportot tartalmaz. Az epiklórhidrinnel készített termék /V/ általános képletü klórhidrin szerkezetében ammónia hatására nukleofil szubsztitúcióval a klór primer amino csoportra cserélődik /ammonolizis/ és igy kapjuk a /VII/ általános képletü terméket. A továbbiakban leírjuk a reakciókörülmények optimálására végzett kísérleteinket. 1./ Az aktiválás optimális körülményeinek meghatározása epi klórhidrlnnél. 1.1. A pH optimum beállítása. 5 g leszivatva szárított agarózt /Sepharose AB. Pharmacia/ 0,325 ml epilórhídrinnal és 6,5 ml különböző molarltasu nátriumhidroxid oldatokkal elegyítettük, majd 2 órát szobahőfokon rázattuk. Ezután desztillált vízzel semlegesre mostuk, majd 15 ml acetonnal eltávolitottuk az aktiválószer nyomait. Ezt ismét desztillált vizes mosás követte, majd a leszivatott gélt 7»5 ml 12 M-os HHj oldatban egy éjszaka állni hagytuk, és utána desztillált vízzel neutrálisra mostuk. Az aramonolizis előtt a gél klórtartalmának meghatározása 5 M-os nátriumhidroxidban való elfőzós, majd semlegesítés után pCl. mérővel történt. Az ammonollzis után az aminocsoport meghatározást Pailla és Santi módszerével végeztük /Anal. Biochem. /1973/ 52, 363-368/. Mivel a klór meg ha tár ozás és az aminocsoport mérés eredményei + 10 £-on belül megegyeztek, csak az utóbbit tüntetjük fel az 572. ábrán, ahol az /umol aminotartalom per gramm száraz gél értékeket ábrázoljuk7 a reakcióelegy hidroxid ion koncentrációjának függvényében. 1.2» Az optimális hőméraéklet meghatározása. 5 g leszivatva szárított agarózt 0,325 ml epiklórhidrinnel és 6,5 ml 0,25 M-os nátriumhidroxid oldattal elegyítettünk 3
