180215. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmus eredetű inszekticid hatóanyag előállítására
180215 A fermentorokban történő tenyésztés táptalaját adagonként állítjuk elő és a fermentorban sterilezzük' 45 percig 121öC-on, A tenyésztést rozsdamentes acélfermentorokban végezzük. A kul-, túrákat percenkénti 150 fordulattal keverjük, a levegőztetés mértéke 0,5 liter per liter per perc és az inkubáció hőmérséklete 20-30°C. ’’Anaerob shock" alkalmazásához /a korai sejtszétesés gátlása céljából/ a levegőztetést 5-6 órára megszakítjuk a tenyésztés 12. órájában. A levegőztetés megszakításának időtartamát oxigén-analizátorral határozzuk meg. A tenyésztés a sejtek korai szétesése és a fenti ’’anaerob shock" nélkül hajtható végre, ha a táptalaj pH-ját a tenyésztés alatt úgy szabályozzuk, hogy ne csökkenjen 6,3 alá. A spóraképződés és az endotoxin-kristályok kiszabadulása 35-áO órás tenyésztés alatt teljessé válik. B/ Elválasztás és tisztítás A spórákat és a kristályos endotoxint a baktériumok teljes szétesése után választjuk el az exotoxintól. A vizoldható exotoxint előnyösen dialízissel távolitjuk el. A spórák és az emlősökre nézve nem mérgező endotoxin-kristályok elegyét ezzel a módszerrel nyerjük ki* A vizoldható exotoxin jelenlétét vagy hiányát a Bond és munkatársai által leirt biológiai próbával határozzuk meg. A biológiai próba táptalajának elkészítése céljából 10 g elporitott agar, 500 ml friss tej és 7 g élesztő keverékét felmelegitjük, majd 10 ml-ét átvisszük egy 250 /ul teszt-oldatot tartalmazó 9 cm átmérőjű Petri-csészébe. A gél megszilárdulása után hozzáadunk 20 házilégy-tojást. A csészéket 48 óráig 30°C-on inkubátorban tartjuk. Megfigyeljük a lárvaképződést és az agar-gél zavarosodását, Ez azt jelenti, hogy nincs jelen exotoxin. £$.. P. M. Bond, C.B.C Boyce és S.J.French, Biochem. J. 114, 477-488 /1969/jf • A vizoldható exotoxintól megszabadított bermékét tovább feldolgozzuk és szokásos módon használjuk rovarölő szerek előállításához. 0/ Szárítás A szárítást a következő módszerek egyikével hajtjuk végre 1 A spórákat és endotoxin-kristályokat tartalmazó elegyet elkeverjük bentonittal és a keveréket vékony film alakjában le* mezekkel ellátott levegőztetett száritóba helyezzük 40-45o0-on£ A kapott keveréket vizben szuszpendáljuk és a szuszpen1*ziót rotációs vagy pneumatikus szárítókban megszáritjuk. A kapott keveréket porlasztva száritóba fuvatjuk. D/ Finomra aprítás és szitálás Ha a szárítást permetező száritóban végeztük, a kapott termék nem szorul további aprításra. Ha levegőztetett szárítókéban lemezeken szárítottuk, a terméket Alpina-tipusu készülékben felapritjuk és legalább 0,08 mm-es A80 mesh/ finomságú szitán átszitáljuk. ................ E/ Aktivitás meghatározása A meghatározást a következő módszerek szerint hajtjuk végre i A jelenlévő élő spórák megszámolásával lemezöntéses eljárást alkalmazunk és rovarokon biológiai kísérleteket végzünk A kapott termékeket a "Lutte Biologique et Biocinótigue de la Miniere /I.N.R.A./" francia laboratóriumok szabványos meghatározásai és mérései szerint standardizáljuk. 4
