180021. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 20 alfa-hidroxi-metil-pregna-1,4-dién-3-on, 20 alfa-hidroxi-metil-pregn 4-én-3-on vagy ezek elegyének előállítására
melni, azt úgy értjük, hogy a találmány szerint az eljárásban bármilyen mikroorganizmus alkalmazható, mely a HPD-t, a 4HP-t vagy ezek elegyét főtermékként képes termelni. Mind a leírásban, mind az igénypontokban azt a fogalmat, hogy a HPD-t, illetve a 4HP-t főtermékként termelik, úgy értjük, hogy a TelhasznáÍt szterin szubsztrátumhoz viszonyítva a HPD és a 4HP együttes kitermelése mólszázalékban kifejezve meghaladja az 50%-ot, vagyis teljesül az alábbi egyenlet : ahol Y jelenti a %-ban kifejezett kitermelést, gj a képződő HPD-mennyiséget (mólban), g2 a képződő 4HP mennyiséget (mólban) és G a felhasznált szterin menynyiségét (mólban). A Mycobacterium génuszhoz tartozó ismert törzsek (továbbiakban: vad törzsek) nem termelik a HPD-t, illetve a 4HP-t főtermékként akkor sem, ha szterin szubsztrátummal végzünk fermentációt. Ezért a találmány szerinti eljárásban alkalmazott mikroorganizmus a vad törzsektől egyértelműen megkülönböztethető annál fogva, hogy a találmány szerinti mikroorganizmus a HPD-t, illetve a 4HP-t főtermékként termeli. Ez a mikroorganizmus a Mycobacterium parafortuitum komplex olyan mutánsa, melyben nincs vagy kevés a HPD-t és/vagy 4HP-t lebontó enzim, illetve az olyan enzim, mely az anyagcserefolyamat későbbi szakaszában aktív. Olyan enzimet sem tartalmaz ez a mutáns számottevő mértékben, mely a metabolikus folyamat azon szakaszában aktív lenne, amelyik szakaszban a szterin átalakul 4AD-vé vagy ADD-vé (pl. 23,24- -bisznorkola-l,4-dién-karbonsavvá), így az anyagcserefolyamat főútja a HPD és/vagy a 4HP irányába tolódik el és HPD és/vagy 4HP halmozódik fel. Ez az új mutáns a Mycobacterium parafortuitum komplex MCI—0617, melyet úgy nyerünk, hogy az alaptörzset (Mycobacterium parafortuitum komplex ATCC 25 790) ibolyántúli fénysugárral kezeljük. Az alaptörzset az angliai NCTC mikroorganizmus gyűjteményben 10 440 nyilvántartási számmal helyezték letétbe, az amerikai ATCC gyűjteményben a letétbe helyezéskor 23 072 számmal vették nyilvántartásba, most 25 790 számmal tartják nyilván (a továbbiakban ezen utóbbi számmal említjük). A mutánst Mycobacterium parafortuitum komplex MCI—0617 megnevezéssel helyeztük letétbe, annak nyilvántartási számai: Fermentation Research Institute-nál : FERM—P—4258, Northern Regional Research Centernél : NRRL B—11 389, Deutsche Sammlung von Mikroorganismen-nél: DSM 1381. A taxonómiai besorolás még nem egyértelműen elfogadott, ezért e kérdést röviden áttekintjük, főleg az „Int. J. Syst. Bacteriol., 27 (1977), 75—85” irodalmi forrásra (továbbiakban: id. mű) hivatkozva; egyéb irodalmi forrásokat hivatkozáskor küíön feltüntetünk. A találmány szerint tenyésztett új mutáns alaptörzsét a „Mycobacterial Taxonomy” tárgyú nemzetközi munkacsoport (IWGMT) második közös' tanulmányában „Mycobacterium parafortuitum komplex” elnevezéssel szerepeltetik (H. Saito et aï., i. m.). Az újsob, M. Tsukamura által definiált Mycobacterium aurtmi törzs (típust örzse a Tsukamura 358 ATCC 23 366) eredetileg magában foglalja a Tsukamura # 309 ATCC 25 790 törzset [M. Tsukamura, Med. Biol., Tokyo, 72 (1966), 270—273]. Később Tsukamura új speciesként ismertette a Mycobacterium neoaurum törzset (típustörzse Tsukamura # 3503 ATCC 25 795), mely különbözik a Mycobacterium aurum törzstől; ekkor az ATCC 25 79Ö törzset még mindig a Mycobacterium aurum törzsként tárgyalta [M. Tsukamura, Med. Biok, Tokyo, 85 (1972), 229—233], A már említett második közös IWGMT tanulmányban azonban javasolták (H. Saito et ah, id. mű 77. o. 1. ábra), hogy az ATCC 25 790 törzs tartozzék a 8. csoportba (megnevezése: M. neoaurum és nem M. aurum), mely nyolc törzsből áll 90%-os egymásközti hasonlósággal, s köztük van a csoport típustörzse: ATCC 25 795). Saito et ah további következtetései: „.. .úgy tűnik, hogy igen jelentős taxonómiai hasonlóság van azon komplexen belül, melyhez M. parafortuitum (Tsukamura), M. diernhoferi (Bönicke és Juhász), M. aurum (Tsukamura), M. neoaurum (Tsukamura) és a Kanazawa törzsek egy csoportja tartozik. Úgy véljük, hogy nem szabad különválasztani ennyire szorosan rokon, normálisan szaprofita, gyorsan növekvő mycobacteriurnokat, ellenkezőleg, inkább egy komplexnek tekintendők, melyet M. parafortuitum komplexnek nevezünk, amíg csak határozottabb azonosításra nincs lehetőség.” M. Tsukamura és S. Mizuno [J. Gen. Microbiol., 98 (1977), 511—517] is hasonló következtetésre jutottak, ti.; hogy az M. parafortuitum, az M. aurum és az M. neoaurum az M. parafortuitum species három alspeciesének tekintendők, vagy egy komplexnek, melynek neve : M. parafortuitum komplex. Az M. parafortuitum komplex morfológiai és fiziológiaijellemzőit és azok összehasonlítását a taxonómiailag rokon törzsekével a következő cikkekben levő táblázatok foglalják össze : H. Saito, Kekkaku, 50 (1975), 402, táblázat; H. Saito et ah id. mű 80—81, 2. táblázat; M. Tsukamura és S. Mizuno id. mű 3. táblázat. Mint már mondottuk, ésszerűnek tűnik az alaptörzs (Tsukamura # 309, ATCC 25 790) taxonómiai helyzetét úgy meghatározni, hogy azt a Mycobacterium parafortuitum komplexhez soroljuk, a már említett második közös IWGMT tanulmány alapján. Az M. parafortuitűm komplex jellemzői a következők : gram-pozitív, saválló, nem mozgékony, nem spóraképző, pálcaalakú, gyorsnövésű, szkotokromogén, Runyon IV. csoportjához sorolható (lásd Sykes and Skinner: Actinomycetales; Charecteristtcs and practical importance. Academic Press, London—New York, 1973, 52—53). Ami a taxonómiai tulajdonságokat illeti, az ATCC 25 790 alaptörzsből leszármaztatott MCI— 0617 mmáns az alaptörzstől alig különbözik; abban különböznek, hogy agar közegen az előbbi durva felületű kolóniákat alkot. így tehát az MCI—0617 törzs az M. parafortuitum komplexhez számítható, mert — mint azt már említettük — az alaptörzset az M. parafortuitum komplexhez soroltuk. Megállapítható, hogy a találmány szerinti új mutáns különbözik mind a Mycobacterium sp. NRRL B—3683 (továbbiakban csak: B—3683) törzstől, mind a Mycobacterium sp. NRRL B—3805 (továbbiakban csak: B—3805) törzstől, melyeket a 3 759 791 és a 3 684 657 lsz. USA szabadalmi leírások, mint 4AD-t és ADD-t térmelő mutáns törzseket ismertettek (nemrég a 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
