179995. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a légzőszerven keresztűl beadható vakcina és késztmény előállítására
7 179995 8 kevesebb, mint a fagyasztva szárítással eltávolított víz mennyisége, de elegendő arra, hogy légzőszerven keresztül való beadásra alkalmas vizes sejtszuszpenziót alkosson. A hozzáadott steril víz például 40—60%-a lehet a sejtekből eltávolított víznek. Ily módon az élő sejtek koncentrációja növelhető, és a: sejthígítás és élő sejt veszteség hatása is ellensúlyozható.; 1:; 4 ;; ír , . A sejtszuszpenzió visszaállítására használt steril víz előnyösen nedvesítőszert tartalmaz, hogy a sejtek hidratálását és nyálkahártyába való. behatolását elősegítse. A nedvesítőszer a használt mennyiségben nem gátolhatja a sejtek tenyésztését. Ezért a kationos nedvesítőszerek’általában nem alkalmasak, mert a baktériumok növekedését gátolják. Előnyöseké nem-ionos nedvesítőszerek, de gátló hatástól mentes anionos nedvesítőszerek közül â Triton X 100 (oktil-fenoxi-polictoxi-etanol) használható (beszerezhető a Rohm and Haas Company', Philadelphia, Pennsylvania bégtől). Azt találtuk, hogy ez a nedvesítőszer nagyon kis koncentrációban,'például a steril vízre számított 0,01% koncentrációban is hatásos. Egyéb használható nem-ionos 'nedvesítőszer a Neodol (9—12 szénatomos etoxilát) (beszerezhető a Shell Chemical Company, Houston, Texas cégtől), nagyon híg koncentrációban használható anionos nedvesítőszer például a nátrium-laurilszulfát, a faggyúalkilszulfát és a nátrium-dodecilszulfát. A kereskedelemben kapható egyik anionos nedvesítőszer az Orvus AB granulátum (lineáris alkánszulfonát) beszerezhető a Procter and Gamble Company, Cincinnati, Ohio cégtől) és a Conco—AAS—35 (35%-os nátrium-dodecilbenzölszulfonát ; beszerezhető a Continental Chemical Co., Clifton, New Jersey cégtől). Ezeket a nedvesítőszerekét nagyon kis — például 0,01% vagy ennél még kisebb — koncentrációban lehet a találmány szerinti eljárásban használni. Az egyéb olyan, nem-ionos vagy anionos nédvesítőszerekre vonatkozóan, amelyeket a találmány szerinti eljárásban használni lehet, utalunk a Surfactant Science Series :>Nonionics (1967); Anionics (1976) közleményekre [Maróéi Dekker, Inc., New York, N.Y.|."< . 5 m ' - '"! A légutak nyálkahártyái hajlamosak ellenállni a sejtek befogadásának. A felső légzőszervi utak csillószőrös felhámszövete igyekszik’a sejteket kidobni az orrjáratokból. Hajlamosa szervezet az idegen anyagnak a szájból, torokból, légcsőből való eltávolítására is. A hatékony használat érdekében a légzőszervi vakcinának ellen kell állnia ennek a kidobásra irányuló hajlamnak. Az a véleményünk, hogy a vakcina-szuszpenzió kialakítására használt,' steril vízben levő nedvesítőszer elősegíti'a- sejtek kivetéssel szembeni ellenállását, és előmozdítja a sejtek beépülését a nyálkahártyába. A nedvesítőszer csökkenti a légzőszervi nyálkahártyán áramló nyálkafolyadék felületi feszültségét, ezáltal az életképes sejtek gyorsabban és szorosabban érintkeznek a nyálkás szövetekkel. Ily módon a sejtek megmaradása és a nyálkás szövetben való telepképzése könnyebbé válik; és ez a telepképzés idézi elő a helyi immunitást a későbbi virulens (patogén) Bordetella' bronchiseptica fertőzéssel szemben. . ;!■; • )t ■ ;• v <■ : > • Ha a vakcinát sertéseknél előnyös módon intranazálisan alkalmazzuk, akkor kívánatos, hogy a vakcinát mindkét orrlyukba bejuttassuk. A mindkét orrlyukba bejuttatott teljes vakcinaadag 1 • lö6—1 • 108 sejtmenynyiség lehet, és ezt 0,7—1,3 ml-nyi mennyiségben adhatjuk be. Például az orrlyukanként 0,5 ml vakcinaadagot ml-enként 4 ■ 106 élő sejtkoncentrációval adjuk be, ezáltal mindegyik orrlyuk nyálkahártyájára; 2 • 106 sejt jut. Hasonló eljárást, azaz intranazális beadást lehet kutyáknál is alkalmazni. Véleményünk szerint 'aizonban kutyáknál a vakcina használatának legkönnyebb éslegeredményesebb módja a garaton át való beadás. A klinikai légcső-hörghurutos köhögés esetén a fertőzés helyét a kutya torkában, különösen a légcsőben találjuk. Azt tapasztaltuk, hogy ha kis mennyiségű, például 0,5— 1,5 ml sejtszuszpenziót viszünk be a garat felső részébe (nasopharynx), akkor a garat és a légcső nyálkahártyáján hatékony telepképződés következik be. A' kívánatos sejt koncentráció ugyanaz, mint az intranazális beadásnál, azaz 1 ■ 106—1 • 108 sejt/ml. Például 4 • 106 koncentráció megfelelő. Az a véléményünk, hogy mind az intranazális, mind az intrafaringeális beadás esetén a vakcina ml-enként legalább 1 : 106 életképes sejtet tartalmazzon. > > v '. • r- ; «cl ’ ■ i'A légzőszerven keresztül beadható Bordetella bronchiseptica vakcinákat előnyösen kétfiolás csomagolási rendszerként állíthatjuk elő. Az egyik fiola a fagyasztva szárított sejtek mért mennyiségét tartalmazza, és egyetlen adagból vagy többszörös adagból állhat. Ez a fiola például adagonként 1 • 106—1 ■10® életképes sejtet tartalmazhat. így például az egyetlen 'adagot tartalmazó fiola 4 -106 életképes sejtet tartalmaz. A másik fiola a steril vizet és előnyösen az ebben oldott nedvesítőszert, például 0,01% koncentrációjú Triton X 100-at tartalmazza. A második fiolában levő víz mennyisége lényegesen kevesebb, mint a fagyasztva szárítással eltávolított víz mennyisége. A második fiola például 1 ml vizet tartalmaz az első fiolában levő, fagyasztva szárított sejteknek a szuszpendálására, amely fiolából a liofilizálással 2 ml vizet távolítottunk el. Általánosabban kifejezve, a második fiolában a víz — amint fentebb már jeleztük — az első fiolában lévő sejtek fagyasztva szárítása folyamán eltávolított víz 40—60%-a legyen. A használt víz térfogata elegendő legyen a sejtek vizes szuszpenziójának kialakítására. A víz mennyisége rendszerint sejtadagonként 0,7—1,3 ml lehet. i- . . • « • > A vakcinaadagot tartalmazó vizes sejtszuszpenziót fecskendő jellegű műszerrel lehet beadni vagy a ' vizes szuszpenziót a nyálkahártyára lehet porlasztani. Például szabványos steril 1 ml-es műanyag fecskendőt használva, 1 ml beadásra előkészített vakcinát felszívunk a fecskendőbe, ügyelve árrá, hogy a fecskendőbe való felszívás előtt a sejtek tökéletesen legyenek előkészítve és szuszpendálva. A fecskendő csöve fölé helyezett hosszú műanyag orrbevezetőt használva, a bevezető hegyét az orr nyálkahártyájára való juttatáskor :az orrlyukba helyezzük vagy a garat nyálkahártyájára való juttatáskor a szájba illesztjük be. Az intranazális alkalmazáskor a fecskendő tartalmának felét-— 0,5 ml-t kell az orr egy-egy lyukába juttatni, míg a garat felső részébe a teljes fecskendőtartalmat — 1,0 ml-t — juttatjuk. Másképpen a vizes szuszpenziót intranazális vagy immorális porlasztó segítségével visszük be. Porlasztó alkalmazásakor a használt vakcina mennyisége ugyanaz lehet, mint a fecskendő alkalmazásakor, de kívánt esetben a vakcina nagyobb mennyiségét is be lehet juttatni. ■’ : A találmány szerinti eljárásban használható mélyhűtés ellen védő- és stabilizálószerek jól ismertek a baktériumséjtek tartósításának technikájában. Ezek a sze-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
