179995. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a légzőszerven keresztűl beadható vakcina és késztmény előállítására
3 179995 4 enyhe károsodását okozza. Nem volt bizonyítható, hogy a Bordetella bronchiseptica a sertésben virulens alakká alakult volna vissza, de tartani lehetett attól, hogy a D—I törzs más állatokat, például kutyákat megfertőzhet. Az az igény, hogy olyan hatásos élő, orron át beadható vakcinát kellene találni, amelynek nincs hátrányos hatása, és nem marad meg az orr nyálkahártyájában, mindezideig nem nyert kielégítést. Ismeretesek parepteráüs vakcinák is intramuszkuláris injekció céljára. Az egyiket például a Bordetella bronchiseptica egyik B, törzseként azonosított virulens törzséből állítottak elő, de ez a teljes sejtet tartalmazó vakcina nem váltott ki megfelelő ellenállást az orrüregi fertőzéssel szemben [Harris és Switzer: Am. J. Vet. Res., 30, 1161—1166 (1969. július)]. A sejteket a bakterin képzésére elölték. A 4 016 253 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás a D—1 törzs (ATCC 31124 számú) elölt teljes sejtjeiből előállított intramuszkuláris injekcióra alkalmas parenterális vakcinát ismertet. A parenterális vakcinák, például a D—1 törzs vakcinájával kiváltott rezisztencia a Bordetella bronchiseptica okozta fertőzéssel szemben különbözik attól az immunitástól, amit a sertések élő Bordetella bronchiseptica intranazális fertőzésével lehet elérni. A parenterális vakcina alkalmazása nem akadályozza meg a virulens Bordetella bronchiseptica okozta orrüregi fertőződést, bár az orr fertőzésének felszámolását meggyorsítja, és az atrófiás ormyálkahártya gyulladással együttjáró nagymértékű károsodás és az orrkagylócsont-sorvadásnak nevezett szekunder orrkagylócsont-roncsolódás ellep hatékonyan véd. Ezenkívül a parenterálisan vakcináit sertések orrjáratainak már enyhe fertőzöttsége is hajlamossá teszi a sertéseket a légutak másodlagos fertőződésére. A serések számára használt D—1 törzs parenterális vakcináját nem találtuk hatékonynak a kutyák Bordetella bronchiseptica elleni immunizálására. A keringő antifest-titer növekszik ugyan, de a kutyák a fertőzést megkapják, és a légcső-hörghurutos köhögés tünetei jelentkeznek, Ezenkívül a E>—1 törzs vakcinát parenterálisan beadva, nemkívánatos mellékhatások jelentkezhetnek, például kutyákban az injekció helye megdagad, túlérzékenységi sokk és egyéb toxikus hatás mutatkozhat. Egyes kutatók közölték, hogy kutyákat BordeteiJa bronchiseptica fertőzés ellen kísérletileg parenterális vakcinával immunizáltak [MeCanldish és munkatársai; Vet. Rec., 98,156—157 (1976); Shelton és munkatársai: Vet- Med- (Small Animal Clinician, 1977. február, 189—193)]. Más kutatóknak azonban nem sikerült MeCanldish vagy Shelton eredményeit megismételni [Bemis, Greisen és Appel: J. Infect. Disease, 135, 753— 758 (1977. május)]. Shimizu 1978-ban tengerimalacokkal végzett kísérleteiről számolt be; ezekben a Bordetella bronchiseptica hőmérsékletérzékeny mutált törzséből előállított intranazális vakcinát használt [Infect. Immun., 22(2), 318— 321 (1978. november)]. A gyöngített, élő vakcinaként való lehetséges alkalmazásban kedvező tulajdonságúnak leírt hőmérsékletérzékeny ts—534 törzs 32°C-on szaporodik, és 34°C-on képtelen fejlődni. Mivel a sertés orrkagyló-nyálkahártyájának hőmérséklete körülbelül 32— 34°C, tengerimalacokkal végeztek kísérleteket, és azt találták, hogy a mutáns törzs az orrkagylóban először nagymértékben növekedik, majd visszafejlődik. Az adatok azonban nem mutattak öntisztuló hatásra ; a beoltás után 4—6 héttel szövetgrammonként 103—104 sejtet találtak- Ezenkívül — bár a ts—534 törzs az egyéb mutáns törzseknél kevésbé hajlamos a Bordetella bronchiseptica virulens vagy vad alakjává visszaalakulni — még mindig jelentékeny volt a visszaalakítás. A Shimizuféle ts—534 törzsből tudomásunk szerint nem áhítottak elő kereskedelmileg elfogadható vakcinákat-A találmány tárgya eljárás a Bordefella bronchiseptica által okozott fertőzésben szenyfgő álfátoknak légzőszerven keresztül beadható vakcina gjőá]lft|sgra, és a vakcina a? ATCC 31437 számú törzsként azonosított, módosított BordeteiJa bronchiseptica vagy egy ebből származó, és a légzőszerven keresztül történő beadásra lényegileg azonos tulajdonságú törzs élő sejtjeinek vizes szuszpenziójából áll, és ez a vizes szuszpenzió ipilliliterenkint legalább 2 ■ 103 emljtett élő sejtet tartalmaz. A BordeteiJa bronchiseptica 55. törzs élp mintáit az American Type Culture Collection, Rockville, Md. intézetben 1978-ban letétbe helyeztük és most ezek kívánság esetén rendelkezésre állnak. Ezt a törzset az ATCC 31437 számmal jelölték és ezt az elnevezést a továbbiakban az 55. törzs másik elnevezéseként fogjuk felhasználni. Az 55. törzset 1955-ben egy ki nem fejlődött tüdőgyulladásban szenvedő sertés tüdöszuszpenziójával internazálisan beoltott kísérleti sertés tüdőgyujladásos tüdejéből és normális orrüregéből izoláltuk. A kezdeti oltóanyagot csoportosan előidézett pj-rnyálkahártya-gyulladásos sorvadásban szenvedő és tüdőgyulladásos sertésből nyertük- Ezt a mikroorganizmust 1955-ben triptózfoszfát folyékony táptalajt tartalmazó, gumidugóval lezárt 100 ml-es kémcsövekbe oltottuk be, és 37°C-on inkubáltuk. Ezeket a kémcsöyeket ezután túlélési kísérletekben tartósan vizsgáltuk. A következő években a tenyészeteket számos esetben vizsgáltuk, és életképesnek találtuk. J7 év múlva, 1972 januárjában sorozatos átültetés nélkül az egyik kémcső tartalmát 5%-os lóvér agaron tenyésztettük. Két rendklyül érdes baktériumtelep fejlődött ki, és az egyik telepet friptóz-foszfát folyékony táptalajra vittük át, Ezt a mikroorganizmus) ezután nagymértékben módosított Bordetella bronch.ísepticának találtuk, és 55. törzsnek neveztük-Rendszertani jellemzői tekintetében az 55. törzs töbjb szempontból különbözik mind a Bordetella brouphiseptica virulens törzsétől (B törzs), mind a D—1 gyengített törzstől. (1) Módosított MacÇonkey-féle agaron Euraltadope nélkül az 55. törzset 37°C-on inkubálva, „csipkés” szélű telepeket alkot (és ezért hőmérsékletre nem érzékeny). A D—1 és a B törzs telepeinek szélei hullámosak. A telep átmérője 48 óra után körülbelül 1 mm, és hoszszabb inkubálás után a telepek több mm átmérőt is elérnek. Mindhárom törzs 5%-os lóvér agaron köralakú, sima, homogén, átlátszatlan és ép szélű telepeket alkot. A Bordetella bronchiseptica telepeinek alakja és mérete a tenyészetben levő mikroorganizmus koncentrációjától, az inkubálás időtartamától, és 37° C-on vagy szobahőmérsékleten való inkubálás időtartamától és az inkubálás időtartama alatti relatív nedvességtől nagymértékben függ. A módosított MacConkey-féle táptalajon Furaltodone nélkül tenyésztett öreg telepeket jellemzi a telep közepének besüppedése és a telep széléről kiinduló határozottan sugaras vonalak, ami a telepet „kocsikerék” alakúvá teszi. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
