179956. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antigének enzimjelzéses immunológiai meghatározására
-N MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 179956 Bejelentés napja: 1977. XII. 9. (EA—179) Elsőbbsége: 1976. XII. 10. (51709/76) Nagy-Britannia Nemzetközi osztályozás: NSZO3 C 12 Q 1/00 G 01 N 33/54 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1982. V. 28. • Megjelent: 1984. V. 31. 1 _ StabacHmi Tár. ) Feltalálók: Marks Vincent vegyész, Guildford, Surrey, Bridges James Wilfrid vegyész, Reading, Berkshire, Morris David vegyész, Stoke Poges, Berkshire, O’Sullivan Michael John vegyész, Ash, Nr. Aldershot, Surrey, Gnemrrii Ernesto vegyész, Woking, Surrey, Nagy-Britannia Eljárás antigének enzimjelzéses immunológiai meghatározására Szabadalmas: Farmitalia Carlo Erba S. p. A., Milano, Olaszország 1 2 A találmány tárgya új eljárás antigének kimutatására és mérésére enzimjelzéses immunológiai meghatározással. A leírásban és az igénypontokban az „antigén” kifejezés nem csak olyan anyagokat jelent, amelyek önmaguk képesek arra, hogy állatokban antitest-termelődést váltsanak ki, vagyis nem csak az immunogéneket, hanem olyan anyagokat is — amelyeket néha hapténeknek is neveznek —-, amelyek csak egy hordozómolekulához kapcsolva képesek arra, hogy specifikus antitestek termelődését kiváltsák, és ezekkel reagáljanak. Antigének jelenlétének a kimutatása és mérése elméleti és gyakorlati szempontból is érdeklődésre tarthat számot. Ezek az anyagok gyakran komplex és sokszor ismeretlen kémiai szerkezettel rendelkeznek, és biológiai 15 és más anyagokban igen kis koncentrációkban vannak jelen, ezért ezekhez a szokásos analitikai módszerek nem használhatók. Ezért az elmúlt néhány évben számos olyan antigén-antitest reakción alapuló eljárást dolgoztak ki, ahol valamely reakciókomponenst radioaktív 20 nyomjelzővel vagy például egy enzimmel megjelölnek, s így a reakciótermékek, vagy némely esetben a fel nem használt reagensek kimutathatók és/vagy mérhetők. A radioaktív jelzések alkalmazásán alapuló eljárásoknak vannak ugyan elméleti előnyei, főképpen az, hogy 25 bizonyos típusú jelöléseknél, így azoknál, ahol tríciumot vagy 14C-et használnak, a radioaktív nyomjelző maga nem vesz részt az antigén-antitest reakcióban. De vannak ezeknek az eljárásoknak bizonyos hátrányai is, amelyek ennek a technikának a használatával összefüggnek, 30 elsősorban a radioaktív nyomjelző méréséhez szükséges berendezés beszerzése, a dolgozók megvédése a radioaktivitás lehetséges káros hatásaitól és a radioaktív hulladék eltávolítása az eljárás befejezése után. Számos 5 radioaktív jelzőanyagot el kell dobni szabályos időközökben, a radioaktív izotóp radiokémiái bomlásának megfelelően. Nehézséget okozhat továbbá radioaktívan megjelölni kis molekulasúlyú antigéneket úgy, hogy esszenciális antigén-tulajdonságaikat megtartsák. Ezért 10 elég nagy érdeklődés kíséri azokat az eljárásokat, ahol az antigén-antitest reakciót olyan reagenssel követik, amelyben enzim szerepel jelzőanyagként. Ezek az eljárások viszonylag egyszerű berendezést használva könnyen elvégezhetők, és az egészségre nem ártalmasak. Az eddig javasolt eljárásoknál sok esetben hátrányt jelentett azonban az, hogy a művelet sikeres elvégzéséhez a jelzőanyagként használt enzimből és a kimutatandó antigénből konjugátumot kell készíteni. Ennek a konjugátumnak az elkészítése nem mindig könnyű, mivel meg kell őrizni a konjugátum enzimrészének az enzimaktivitását, és igen kényelmetlen, mivel külön konjugátumot kell készíteni minden egyes kimutatandó antigénnel. A találmány szerinti eljárásban azonban egyetlen enzimtartalmú konjugátum használható nagyszámú antigénhez. Elvileg tulajdonképpen egyetlen konjugátum is használható valamennyi antigénhez. Egy előző javaslat szerint [Engvall és tsai: J. Immunology, 109, 129 (1972)] antitestet úgy határoztak meg, hogy azt oldhatatlan hordozón antigénnel reagáltatták, ezt követően a hordozón levő antigén-antitest konjugá-179956
