179930. lajstromszámú szabadalom • 3,3',5,5'-tetraalkil-benzidin tartalmú gyorstesztek
7 179930 8 Az így elkészített tesztpapír hidrogén-peroxiddal vizes oldatban, például tejben kékeszöld színreakciót ad, melynek alsó koncentrációja 0,1 mg%. 5. példa Tesztpapír koleszterin és koleszterin-észterek kimutatására szérumban Szűrőpapírt (Schleicher-Schüll 597 NF) a következő összetételű oldatokkal impregnálunk és 40 °C-on szárítunk: 1. oldat 1M citrátpuffer, pH 7 20,0 ml, Koleszterin-oxidáz (60 E/mg) 0,1 g, Koleszterin-észteráz (18 E/mg) 0,25 g, Peroxidáz (70 E/mg) 0,05 g, Desztillált víz 100,0 ml-ig. 2. oldat 3,3 ',5,5 '-Tetrametil-benzidin 0,28 g, Oktilfenol-polietilénglikoléter (Triton X—100) 0,5 g, Metilén-klorid 100,0 ml-ig. Az így kapott tesztpapírok koleszterint és/vagy koleszterin-észtereket tartalmazó szérumokkal zöld színárnyalatokkal reagálnak, melyeknek intenzitása megfelel a koleszterin koncentrációjának. Tetrametil-benzidin helyett o-tolidint tartalmazó megfelelő tesztpapírok ugyancsak zöld, de kevésbé intenzív színtónusokkal reagálnak. A következő példákban két, eddig nem ismert I általános képletű vegyület előállítását írjuk le. 6. példa 3,3 '-Dimetil-5,5 '-dietil-benzidin I. Eljárásváltozat Keverővei, csepegtető tölcsérrel és hőmérővel ellátott háromnyakú lombikban 96,5 g (0,564 M) 2-metil-6-etil-anilin-hidrokloridot 79,5 ml tömény sósav (d= 1,18) és 330 ml víz elegyében szuszpendálunk és jeges hűtés közben 0—3 °C-on, keverés közben, 30 perc alatt 150 ml vízben oldott 39 g nátrium-nitritet csepegtetünk hozzá. Körülbelül 1 óráig 0—3 °C-on tovább keverjük és a diazóniumsó-oldatot 600 ml jeges vízzel hígítjuk. Közben keverővei, csepegtető tölcsérre] és hőmérővel felszerelt 6 literes háromnyakú lombikba bemérünk 900 ml vízben oldott 210 g réz(II)-szulfátot és hozzáadunk 363 ml koncentrált ammóniaoldatot (d=0,88). Ezután 90 g hidroxil-ammónium-kloridot 150 ml vízben oldunk és jeges hűtés közben hozzácsepegtetünk 72 ml vízben oldott 95 g kálium-hidroxidot. Ezt a jól lehűtött oldatot 10—15 °C-on, nitrogénatmoszférában, 15 perc alatt, keverés közben hozzáadjuk a réz-tetramin-oldathoz, miközben világoskék réz(I)-sókomplex képződik. Jeges hűtés és erőteljes keverés közben, nitrogéngáz alatt, 12—15 °C-on, 1,5 óra alatt hozzácsepegtetjük a lehűtött diazóniumsó-oldatot (a csepegtető tölcsért bevezetőcsővel látjuk el, amely U-alakú hajlattal a rézsóoldat felszíne alá nyúlik). A hozzáadás befejezése után 1 óráig folytatjuk a keverést, majd a reakcióoldatot 4 x 200 ml éterrel kirázzuk. Az egyesített éteres kivonatokat 3 x 50 ml 25%-os nátronlúggal, 2x 100 ml vízzel, 3 x 100 ml 2N sósavoldattal és 2x 100 ml vízzel átrázzuk. 55,4 g azovegyületet kapunk piros olaj alakjában. Kromatográfiás elválasztással szilikagéloszlopon (töltési magasság 100 cm, oszlop-átmérő 4,8 cm; szilikagélmennyiség 1,5 kg, részecske-átmérő 0,063—0,2 mm) kloroform/ligroin 1: 4 eleggyel 33,7 g tiszta 2,2'-dimetil-6,6'-dietil-azo-benzolt kapunk piros olaj alakjában. Ezt 1,6 liter dielil-éterben oldjuk, hozzáadunk 330 ml etanolt, majd 1,5 liter vízben oldott 135 g ammónium-kloridot és erőteljes keverés közben, részletekben, 22 cC-on 300 g cinkport adunk hozzá. 5 órai keverés után a redukció befejeződik. A csaknem teljesen elszíntelenedett szerves fázist elválasztjuk és a vizes réteget 3 x 250 ml éterrel kirázzuk. Az egyesített éteres kivonatokhoz 210 ml 3N kénsavoldatot adunk és keverjük. Eközben a szulfát először színtelen, tapadós csapadék alakjában válik ki. 200 ml etanol hozzáadása után 30,5 g 3,3'-dimetil-5,5'-dietil-benzidin-szulfátot kapunk színtelen kristályok alakjában. E terméket 150 ml forrásban levő vízhez adjuk, keverés közben lehűtjük szobahőmérsékletre, hozzáadunk 200 ml 2N nátronlúgot és 4x 100 ml kloroformmal extraháljuk. Az egyesített kloroformos kivonatokat nátrium-szulfát felett szárítjuk és bepároljuk. 25,5 g világosbarna kristály marad vissza. E nyersterméket metanol/víz elegyből átkristályosítjuk. 23 g=30,4% beige-színű kristályt kapunk; olvadáspont 69—70 °C. A dihidroklorid (C18H24N2.2 HC1) olvadáspontja 289—291 C (bomlás). II. Eljárásváltozat 1,5 g alumíniumot és 0,1 g higany-kloridot 75 g anilinnel autoklávban 300 °C-ra melegítünk, miközben az alumínium hidrogénfejlődés közben feloldódik. Lehűlés után 92 g o-toluidint és 4,5 g vízmentes alumínium-kloridot adunk hozzá. Ezután 280—300 °C-ra melegítjük és 200 atm nyomású etilént vezetünk be. Körülbelül 3 óra múlva az etilénfelvétel megszűnik. Ezután lehűtjük és a reakciómasszát híg nátronlúggal kirázzuk. A szerves fázisból vákuumban 2-etil-anilint és 2,6-dietil-anilint desztillálunk le (körülbelül 120 °C/10 Hgmm-ig). A maradékot híg sósavoldatból többször átkristályosítva 3,3'-dimetil-5,5'-dietiI-benzidin-hidrokloridot kapunk; olvadáspont 288—292 °C (bomlás). 7. példa 3,3',5,5'-Tetraizopropil-benzidin 100 g 2,6-diizopropil-anilin 1280 ml vízzel és 102 ml tömény sósavval (d = 1,18) készült oldatát 90 °C-ra melegítjük és gyorsan kálium-[hexaciano-ferrát(III)] 5100 ml vízzel és 143 g nátrium-hidroxiddal készült 97 °C-os oldatához adjuk. A keletkező szabad hidrogén-cianid miatt jó huzatú elszívófülkében dolgozunk. A képződött piros szuszpenziót még 15 percig keverjük, lehűtjük és 6 X 300 ml éterrel kirázzuk. Az éteres kivonatokat nátrium-szulfát felett szárítjuk, leszívatjuk és 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
