179930. lajstromszámú szabadalom • 3,3',5,5'-tetraalkil-benzidin tartalmú gyorstesztek
5 179930 6 2,5-Dimetil-hexán-2,5-dihidroperoxid (kb. 70%-os) 1,6 g, Foszforsav-trimorfolid 12,7 g, Etanol 30,0 ml, Desztillált víz 100,0 ml-ig. 2. oldat 33 ',5,5 '-tetrametil-benzidin 0,3 g, Fenantridin 0,2 g, Toluol 100,0 ml-ig. Fehér tesztpapírt kapunk, amely vértartalmú vizeletbe mártva körülbelül 5—20 másodperc után kékeszöldre színeződik. Ha a vörös vérsejtek épek, a papíron kékeszöld foltok láthatók. Ha hemolízis lépett fel, vagy eleve szabad hemoglobin van a vizeletben, úgy a papír egyenletesen kékeszöldre festődik. Az érzékenység körülbelül 5 vörösvérsejt/mm* 3 vagy a megfelelő mennyiségű hemoglobin. Kisszámú ép vörösvérsejt jelenlétében a tesztpapiron esetleg még néhány kékeszöld pont képződhet. A mioglobinnal szembeni érzékenység megfelel a hemoglobinnal szemben tanúsítottnak. 3 napig tartó 60 °C-os hőigénybevétel után a tesztpapírok halványsárgára elszíneződnek, érzékenységük lényegében ugyanaz marad, csak reakcióidejük hosszabbodik meg körülbelül 60—90 másodpercre. Ha tetrametil-benzidin helyett o-tolidint használva azonos öszszetételű tesztpapírt készítünk, az hasonló hőigénybevétel után sárgásbarnára színeződik és érzékenysége körülbelül 20 vörösvérsejt/mm3. Azonos érzékenységű és stabilitású, csupán valamivel lassabban és tiszta zöld színnel reagáló tesztpapírokat kapunk ekvimolekuláris mennyiségű 3,3',5,5'-tetrametil-, 3,3'-dimetiI-5,5'-dietil- vagy 3,3’,5,5'-tetraizopropil-benzidint használva. 2. példa Tesztpapír vér kimutatására vizeletben Ha az 1. példa összetételében a dioktil-nátrium-szulfo-szukcinátot azonos mennyiségű lauroil-szarkozinnal helyettesítjük, vagy a felületaktív szert teljesen elhagyjuk, olyan tesztpapírokat kapunk, amelyek bár kevésbé érzékenyek az 1. példában előállítottaknál, de még mindig érzékenyebbek, mint az o-tolidinnal készült megfelelő papírok. A köbmilliméterenként 50 hemolizált vörösvérsejtet tartalmazó vizelettel kapott színreakciókat az alábbi táblázatban foglaljuk össze: Nedvesitőszer Lauroilnélkül -szarkozin Tetrametíl- halványzöld zöld-benzidin o-Toluidin halvány szürkés- halvány barnásbarna szürke 3. példa Tesztpapír glükóz kimutatására vizeletben Szűrőpapírt (Schleicher-Schüll 597 NF) a következő összetételű oldatokkal itatunk át és 50 °C-on szárítunk: 1. oldat Glükóz-oxidáz (70 E/mg) 222 mg, Peroxidáz (70 E/mg) 28 mg, Morfolino-etánszulfonát puffer (pH 6, 1M) 50 ml, Tartrazin 80 mg, Polivinil-pirrolidin 300 mg, Desztillált víz • 100 ml-ig. 2. oldat 3,3 ',5,5 '-Tetrametil-benzidin 600 mg, Etanol 100 ml-ig. Hasonló módon készítünk olyan tesztpapírokat, melyek ekvimolekuláris mennyiségű 3,3',5,5'-tetraetil-benzidint, illetve o-tolidint tartalmaznak. E tesztpapírok glükóztartalmú vizelettel körülbelül 60—120 másodperccel a bemártás után adott reakciószínei az alábbi táblázatban láthatók. Tetrametil-benzidinnel ezek a színek körülbelül 10—15 percig változatlanok maradnak, száradáskor jellegük kékebb lesz és ebben a formában napokig stabilak maradnak. Az o-tolidinnel kapott színek már 5—10 perc múlva sárgulni és halványodni kezdenek és a száradás után körülbelül 2—4 óra alatt — függően a glükózkoncentrációtól — teljesen elszíntelenednek vagy halvány olajbarnák lesznek. Glükóz o-Toluidin Tetrametíl- Tetraetílmg% -benzidin -benzidin 0 sárga sárga sárga 50 világoszöld világoszöld világoszöld 100 zöld kékeszöld középzöld 250 kékeszöld zöldeskék zöld 500 zöldeskék kékesfekete sötétzöld 1000 olajfekete fekete mélyzöld Ekvimolekuláris mennyiségű 3,3'-dimetil-5,5'-dietil-benzidint tartalmazó tesztpapírok a reakciószínek jellege és stabilitása tekintetében gyakorlatilag ugyanúgy viselkednek, mint a tetraetil-benzidinnel készült papírok. 4. példa Tesztpapírok hidrogén-peroxid kimutatására Szűrőpapírt a következő oldatokkal itatunk át és 40 °C-on szárítunk: 1. oldat Trinátrium-citrát, dihidrát 225 mg, Citromsav, monohidrát 175 mg, Peroxidáz (70 E/mg) 50 mg, Nátrium-alginát 150 mg, Polioxietilén-szorbitán-monolaurát (Tween 20) 1300 mg, Vinilpirrolidin-vinilacetát vegyespolimer 375 mg, Desztillált víz 100 ml-ig. 2. oldat 3,3 ',5,5 '-Tetrametil-benzidin 500 mg, Aceton 100 ml-ig. 5 10 15 20 2í 30 35 40 ■15 50 55 60 65 3
