179788. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új karbapeném-származékok előállítására
175*788 44 5. Színreakció Ehrlich-reagéns reakció pozitív Jód-klŐrplátinásáv reakció pozitív Niniíidriri reakció negatív 6. Vékortyréteg-krornáíográfia A PS—6 ahtibiotikűm-tritil-észter a következő Rf értékeket mutatja a megadott feltételek mellett. A migráció helyét Comamonas tèrfigena B—996-on végzett bioaütögrafiäväl fejlesztjük ki. Szilikagél vékonyréteg-kromatográfiai lemezt (Merck, DC-Fertigplatteri Kiesélgel 60 F254) használunk. Mielőtt a vizsgálandó anyagot fel visszük a lemezre, 2,5 p.1 Í0% dimetilformamidot tartalmazó aceton-oldaiot viszünk fel a lemezre. Az Rf értékek áz alábbiak : Oldószerrendszer : benzol/aceton (2/1): Rf=0,37 benzol/etilacetát (1/8): Rf=0,34 A PS—6 antibiotikum szerkezete és a fenti fizikaikémiai tulajdonságok alapján a PS—6 antibiotikum-tritil-észter szerkezete a (Ilb) képletnek felel meg. A PS—6 antibiotikum-tritil-észter biológiai tulajdonságait a következőkben mutatjuk meg. 43 1. Mikrobaellenes spektrum À PS—6 aniibiotikum-tritílészter különböző réziSztens törzsekét magukban foglaló pâtogéh mikroorganizmusokkal szérűben mutátotl minimális gátló, koncentráció értékeit BRAIN HEART INFUSION ÖRoTH „Eiken” (EIKEN CHEMICAL CO., Ltd.) táptalajon táptalajhígítási módszerrel határozzuk meg. A PS—6 antibiotikum-tritij-észtert kis mennyiségű pietartóiban oldjuk és azZál hígítjuk Î5RÂÎN. HEART ItfËtJtèlôft ÉRÓTH „Ejken” ’(EtkËft CÏIËWÏCAL CÖ., Ëtd.) táptalajjal (píi=2,0j. Áz így kápótt oídátbán a PS—6 áritibibtikum-tritil-észter k’óncéhfrációjá 30— 20 p.g/mi és a imetehöÍk:oiibmti^tójfa^rtí haladja még a 10%-ot. Ezt az oldatot kétszeresére hígítjuk. À 7. táblázatban felsorolt mikroorganizmusokat 1.8 órán keresztül 28 °C hőmérsékleten BRAIN ÜÉÀRt INËÜSlbN BROTH „Eiken” táptalajban tenyésztjük, majd heleoltjuk azokat a fentiek szerint hígított sorozatba. Az oltóanyag végső koncentrációja 1 x Í05 sejt/ml. Az eredményeket 35 °C hőmérsékleten 20 órán keresztül végzett inkubáció után olvassuk le. A minimális gátló koncentráció a PS—6 antibiotikum tritil-észterének azt a legkisebb koncentrációját jelenti, melynél a fenti feltételek mellett a megfelelő mikroorganizmusok növekedése nem figyelhető meg. Kontroll antibiotikumként ampicillin és cefaloridin ÉRÁIN ÏIEàRt INFUSION BROTH „Eiken” (pH=7,0) táptalajban készített 100 p.g/ml koncentrációjú oldatát állítjuk elő és az így kapott oldatot a találmány szerinti vegyületekkel készített oldatokkal analóg módon kezeljük. A PS—6 antibiotikurrt-tritil-észter, Valamint a cefaloridin vizsgálata során kapott minimális gátló koncentráció értékeket a 9. táblázat tarmazza. 9.táblázat Minimális gátló koncentráció, fig/ml Mikroorganizmus PS—6 antibiotikum-tritil-észter cefaloridin Staphylococcus aureus FDA • 209P 0,33 0,04 Diplococcus pneumoniae Type IIP* 0,33 0,01 Streptococcus pyogenes NY—5** 0,33 0,01 Alcaligenes faecalis B—326 1,34 3,13 Klebsiella pneumoniae K—2* 20,0 20,0 Citrobacter freundii E—9* 12,5 >100 Proteus vulgaris P—5* 25,0 >100 Enterobacter cloacae E—16* 25,0 >100 * 3-laktamáz termelő organizmus. ** 10% ló vért adunk a táptalajhoz. A táblázat adataiból kitűnik, hogy a PS—6 aritibiotikum-tritil-észter széles spektrumú mikrobaellenes hatással rendelkezik és különösen erős antibiotikus hatású különböző [3-laktárn-fézisztens (ß-laktäm termelő) rnikroorganizmus törzsekkel szemben. 2. In vivo hatás A PS—6 antibiotikum-tritil-észter in vivo hatását egereken vizsgáljuk, melyeket intraperitoneálisan 5 x x 1Ö5 sejt/egér mennyiségű Stáphylocóccus aüreus Smith báktéritimmal fertőztünk. À PS—6 áritibiotikum-tritil-észíert a fertőzést követően áióhrjál sZubkután 'adagoljuk az égérekbe. Ä vegyiíM 50%-ós hatásos ádagjá DDŸ hím Cgérek esetén '(Shizúöká) 5,5 rftig/kg. 3. Toxicitás ,Ä PS—8 ahËhïotikum-trittV-é’sztert írtíraperitóheálisáh àîkâlmâZzuk DÔŸ hint egereken (ShizüÖká). ŐOÖ rfig/kg mennyiségben alkáímázvá akút toxicitás nein lép fél. 11. példa PS—7 antibiotikum-trÎtil-észtèr 24,5 g, 9. példa szerint előállított fehér, ’fagyasztva szárított PS—7 ántibiotikum-hátnúm-söt feloldunk 5 ml dimettlformámídban és 20 p.1 tnetilaftiinban, majd ezt követően hozzáadunk % réákcíóélégyhez 50 míg tritilkloridot. Szobahőmérsékletén 3 órán keresettül történő keverés úfán hozzáadunk a reakcíóéíegyhéz 200 ml bertzólt és 3 x 70 ml 0,1 M foszfát-puffer-óldattál (pH= 6,8) mossuk. Az így kapott reakcióelegyet 3 ml telített vizes nátriumklorid-oldattal dehidratáljuk, majd a benzolos oldatot vízmentes nátriumszulfáton szárítjuk. A benzolt csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és így mintegy 0,5 ml benzolos oldatót kapunk, melyet Éio- Beads S—X3 (Bio-Rad Laboratories) oszlopon (1,2 x x96,0 cm) engedjük át. A kromatogramót benzollal fejlesztjük ki. Az így kapott aktív frakciót összegyűjtjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A vissza5 10 Í5 20 25 U 30 35 h '45 SO 55 'SÓ 65 22
