179788. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új karbapeném-származékok előállítására
45 179788 46 maradó anyagot feloldjuk 0,5 ml acetonban, majd Sephadex LH—20 (Pharmacia Fine Chemicals AB) oszlopra (1,2x96,0 cm) visszük, melyet előzőleg acetonnal kezeltünk, és acetonnal kifejlesztjük a kromatogramot. Az aktív frakciókat összegyűjtjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. így 20,5 mg fehér port kapunk. Ezt az anyagot benzol—n-hexán elegyéből átkristályositjuk. így 15,5 mg színtelen fehér kristályt kapunk, mely a PS—7 antibiotikum tritil-észtere. Az anyagon a következő fizikai-kémiai vizsgálatokat végezzük el : 1. Szín Színtelen 2. Ultraibolya abszorpciós spektrum A PS—7 antibiotikum tritil-észterének ultraibolya abszorpciós spektrumát 100 p.g/3 ml metanol koncentrációban Hitachi Double Beam Spectrophotometer Model 200—20 berendezésben (Hitachi, Ltd.) vizsgáljuk. A“'°H=230,5 nm, 321 nm. 3. Oldhatóság A PS—7 antibiotikum-tritil-észter oldhatóságát úgy vizsgáljuk, hogy 5 mg PS—7 antibiotikum-tritil-észtert 20 °C hőmérsékleten feloldunk az alább felsorolt oldószerek 0,1 ml-ében. Az eredmények a következők: Teljesen oldhatatlan vízben és n-hexánban. Kissé oldódik benzolban, etilacetátban, kloroformban, metanolban, etanolban, acetonban, dimetilformamidban és dimetilszulfoxidban. 4. Színreakció Ehrlich-reagens reakció pozitív Jód-klórplatinasav reakció pozitív Ninhidrin reakció negatív 5. Vékonyréteg-kromatográfia A PS—7 antibiotikum-tritil-észter a következő Rf értékeket mutatja a megadott feltételek mellett. A migráció helyét Comamonas terrigena B—996-on végzett bioautográfiával fejlesztjük ki. Szilikagél vékonyréteg-kromatográfiai lemezt (Merck, DC-Fertigplatten Kieselgel 60 F254) használunk. Mielőtt a vizsgálandó anyagot felvisszük a lemezre, 2,5 p.1 10% dimetilformamidot tartalmazó aceton-oldatot viszünk fel a lemezre. Az Rf értékek az alábbiak : Oldószerrendszer : benzöl/aceton (2/1): Rf=0,51 benzol/aceton (1/1): Rf=0,67 A PS—7 antibiotikum szerkezete és a fenti fizikaikémiai tulajdonságok alapján a PS—7 antibiotikum-tritil-észter szerkezete a (IIc) képletnek felel meg. A PS—7 antibiotikum-tritil-észter biológiai tulajdonságait a következőkben mutatjuk meg. 1. Mikrobaellenes spektrum A PS—7 antibiotikum-tritil-észter különböző rezisztens törzseket magukban foglaló patogén mikroorganizmusokkal szemben mutatott minimális gátló koncentráció értékeit BRAIN HEART INFUSION BROTH „Eiken” (EIKEN CHEMICAL CO., Ltd.) táptalajon táptalajhígítási módszerrel határozzuk meg. A PS—7 antibiotikum-tritil-észtert kis mennyiségű metanolban oldjuk és azonnal hígítjuk BRAIN HEART INFUSION BROTH „Eiken” (EIKEN CHEMICAL CO., Ltd.) táptalajjal (pH=7,0). Az így kapott oldatban a PS—7 antibiotikum-tritil-észter koncentrációja 40— 20 ij-g/ml és a metanol koncentrációja nem haladja meg a 10%-ot. Ezt az oldatot kétszeresére hígítjuk. A 7. táblázatban felsorolt mikroorganizmusokat 18 órán keresztül 28 °C hőmérsékleten BRAIN HEART INFUSION BROTH „Eiken” táptalajban tenyésztjük, majd beleoltjuk azokat a fentiek szerint hígított sorozatba. Az oltóanyag végső koncentrációja 1 x 105 sejt/ml. Az eredményeket 35 °C hőmérsékleten 20 órán keresztül végzett inkubáció után olvassuk le. A minimális gátló koncentráció a PS—7 antibiotikum tritil-észterének azt a legkisebb koncentrációját jelenti, melynél a fenti feltételek mellett a megfelelő mikroorganizmusok növekedése nem figyelhető meg. Kontroll antibiotikumokként ampicillin és cefaloridin BRAIN HEART INFUSION BROTH „Eiken” (pH=7,0) táptalajban készített 100 [xg/ml koncentrációjú oldatát állítjuk elő és az így kapott oldatot a találmány szerinti vegyületekkel készített oldatokkal analóg módon kezeljük. A PS—7 antibiotikum-tritil-észter, valamint a cefaloridin vizsgálata során kapott minimális gátló koncentráció értékeket a 10. táblázat tartalmazza. 10. táblázat Minimális gátló koncentráció, pig/ml Mikroorganizmus PS—7 antíbiotikum-tritil-észter cefaloridin Staphylococcus aureus FDA • 209P 0,16 0,04 Diplococcus pneumoniae Type III** 0,16 0,01 Streptococcus pyogenes NY—5 * ** * 0,16 0,01 Alcaligenes faecalis B—326 1,34 3,13 Klebsiella pneumoniae K—2* 10,0 20,0 Citrobacter freundii E—9* 6,25 >100 Proteus vulgaris P—5* 25,0 >100 Enterobacter cloacae E—16* 25,0 >100 * (3-laktamáz termelő organizmus. ** 10% ló vért adunk a táptalajhoz. A táblázat adataiból kitűnik, hogy a PS—7 antibiotikum-tritil-észter széles spektrumú mikrobaellenes hatással rendelkezik és különösen erős antibiotikus hatása különböző 3-laktám-rezisztens ((3-laktám termelő) mikroorganizmus törzsekkel szemben. 2. In vivo hatás A PS—7 antibiotikum-tritil-észter in vivo hatását egereken vizsgáljuk, melyeket intraperitoneálisan 5 x 105 sejt/egér mennyiségű Staphylococcus aureus Smith baktériummal fertőzünk. A PS—7 antibiotikum-tritil-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 23
