179788. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új karbapeném-származékok előállítására
39 179788 40 1. Mikrobaellenes spektrum A PS—7 antibiotikum nátrium-sójának különböző rezjsztens törzseket magukban foglaló patogén mikroorganizmusokkal szemben mutatott minimális gátló koncentráció értékeit BRAIN HEART INFUSION BROTH „Eiken” (Eiken Kagaku Co.) alkalmazásával táptalajhígttási módszerrel határozzuk meg. A PS—7 antibiotikum-nátrium-sót BRAIN HEART INFUSION BROTH „Eiken” táptalajban oldjuk fel és ezzel hígítjuk. Az így kapott oldat koncentrációja 5— 100 pg/ml közötti. Ezt az oldatot ugyanezzel a táptalajjal tovább hígítjuk és így különböző koncentrációjú oldatokat kapunk. A hígított oldatokhoz hozzáadjuk az oltótenyészetet, melyet úgy készítünk, hogy az 5. táblázat szerinti különböző mikroorganizmusokat rázás közben BRAIN HEART INFUSION BROTH táptalajban tenyésztjük 28 °C hőmérsékleten 18 órán keresztül. Az oltóanyag végső koncentrációja 1 x 105 sejt/ml. A sejtek növekedését 35 °C hőmérsékleten 20 órán keresztül végzett inkubáció után vizsgáljuk. A PS—7 antibiotikumnak a megfelelő mikroorganizmusokkal szembeni minimális gátló koncentrációja az a legkisebb koncentráció, melynél a sejtek növekedése még nem figyelhető meg. Kontroll vizsgálat céljára az ismert antibiotikumokat, a cefazolint és a cefoxitint feloldjuk 1—100 .pg/ml koncentrációban 7,0 pH-érték mellett BRAIN HEART INFUSION BROTH táptalajban, ugyanezzel a táptalajjal különböző hígítású sorozatot készítünk. A különböző mikroorganizmusokkal szemben mutatott minimális gátló koncentráció értékeket a fent leírtak szerint végezzük. Az eredményeket a 7. táblázat tartalmazza. Ugyanitt megadjuk az összehasonlítás céljául szolgáló cefazolin és cefoxitin antibiotikumok minimális gátló koncentráció értékeit is. 7.táblázat Minimális gátló koncentráció, fi/ml Mikroorganizmus PS—7 antibiotikum Cefazolin Cefoxitin Staphylococcus aureus FDA 209P <0,19 0,25 2,50 Diplococcus pneumoniae Type III** <0,19 0,125 2,50 Alcaligenes faecalis B—326 0,78 6,25 1,56 Citrobacter freund ii E—9* 3,13 >100 >100 Enterobacter Cloacae E—16* 6,25 >100 >100 * [í-laktamáz-termelő törzs. ** A táptalaj 10% lószérumot tartalmaz. 2. Ismert [i-laktám vegyületek (í-laktamáz-rczisztens mikroorganizmusokkal szembeni mikrobaellenes hatásának növelése és az ezekkel együtt kifejtett szinergetikus hatás 2,5-szeresre hígított tápanyagot tartalmazó agárhoz (pH—7,0) hozzáadunk cefaloridint, majd a táptalajt beoltjuk [j-laktárn termelő törzzsel, mely [í-laktamázt termel. A táptalaj 10 ml-ét 9 cm átmérőjű Petri-csészébe öntjük és hagyjuk megszilárdulni. így kapjuk a vizsgálati lemezt. A PS—7 antibiotikumot 50, illetve 29 pg/ml koncentrációban feloldjuk, majd 20 pl fenti koncentrációjú oldattal és ennek 2- és 4-szeres hígítású oldataival átitatunk 8 mm átmérőjű cellulózlemezt. A cellulózlemezt a fentiek szerint elkészített tápanyagot tartalmazó agarra helyezzük és 35 °C hőmérsékleten 18 órán keresztül végzett inkubájás után vizsgáljuk a lemez körül a gátló zóna növekedésének mértékét. Kontroll vizsgálat céljából cefalorodin nélkül hasonlóan elkészített táptalajt vizsgálunk. Ezen kívül szintén összehasonlítás céljából készítünk PS—7 antibiotikum helyett 20 pl, 10 000 pg/ml koncentrációjú penicillin G, illetve cefaloridin-oldattal is cellulózlemezt. Az eredményeket a 8. táblázat tartalmazza. 8.táblázat ß-laktäm-rezisztens Lemez Gátló zóna átmérője, mm törzs önmagában cefaloridinnel PS—7 antibiotikum fxl 0,0 19,0 Proteus vulgaris x2 0,0 15,0 P—5 1x4 0,0 11,0 Penicillin G 15,0 15,0 Cefaloridin 12,0 12,0 PS—7 antibiotikum rXl 12,5 13,5 Citrobacter 1x2 0,0 0,0 freundii E—9 1x4 0,0 0,0 Penicillin G 0,0 0,0 Cefaloridin 12,0 12,0 PS—7 antibiotikum fxl 11,0 18,0 Serratia Jx2 0,0 14,0 marcescens 1x4 0,0 0,0 Penicillin G 0,0 0,0 Cefaloridin 11,0 11,0 Az eredmények alapján látható, hogy penicillin G, illetve a cefaloridin ß-laktäm-rezisztens törzsekkel szembeni mikrobaellenes hatása nyilvánvalóan megnő a PS—7 antibiotikum adagolásának hatására olyan esetekben, amikor a PS—7 antibiotikum adagolása nélkül nincsen mikrobaellenes hatás. Ha PS—7 antibiotikum helyett penicillin G-t vagy cefaloridint adagolunk nem nő meg a mikrobaellenes hatás. 3. In vivo hatás A PS—7 antibiotikum fenti hatását egereken vizsgáljuk, melyeket intraperitoneálisan 5 x 105 sejt/egér menynyiségű Staphylococcus aureus Smith baktériummal fertőztünk. A PS—7 antibiotikum-nátrium-sóját a fertőzést követően azonnal szubkután adagoljuk az egerekbe. A vegyület 50%-os hatásos adagja DDY hím egerek esetén (Shizuoka) 7,5 mg/kg. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 20
