179788. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új karbapeném-származékok előállítására
37 179788 38 301 nm-nél 0,086), majd 15 percig a fent megadott feltételek mellett inkubáljuk, anélkül, hogy a PS—6 antibiotikum lényeges mértékben hidrolizálna. (b) Bacillus cereus 569 inducible penicillinase. A PS—6 antibiotikumnak ezzel a ß-laktamäzzal történő hidrolízisét a fent leírt feltételek melleit vizsgáljuk 301 nm-nél a reakcióelegy optikai sűrűségének meghatározásával. A reakcióelegy 3 ml-e 7,5 pmól fenti enzimkészítményt és 77,5 pmól PS—6 antibiotikum szubsztrátumot tartalmaz (a PS—6 antibiotikum végső koncentrációja 25,8 pmól/ml=8,63 ug/ml ; optikai sűrűsége 301 nm-nél 10,366). Ezekből az adatokból Shyun-Long Yun és Clarence H, Seulter módszerével (Biochemica et Biophysica Acta, Vol 480, pp. 1—13, 1977) határozzuk meg a Km-értéket, mely ebben az esetben 17,7 p.M. II. PS—7 antibiotikum 1. Szín Színtelen 2. Oldhatóság Oldható vízben, de gyakorlatilag oldhatatlan acetonban. 3. Bomláspont Az anyag nem egy meghatározott hőmérsékleten olvad. 145—150 °C hőmérsékleten fokozatosan lágyul, térfogata csökken, 220 °C hőmérsékleten szilárdul és már nem színtelen. A mérést Kofler módszerével végezzük BY—I típusú Micro Melting Point Apparatus berendezésben (Yazawa Kagaku Kikaikogyo Co.)a hőmérsékletnek percenként 1 °C-kal történő emelése közben. 4. Ultraibolya abszorpciós spektrum 45 p.g PS—7 antibiotikum-nátrium-sót feloldunk 3 ml M/100 foszfát-pufferban (pH=7,0) (és Shimadzu Digital Double Beam Spectrophotometer UV 210A berendezésben vizsgáljuk (4. ábra). A jellemző értékek az alábbiak : >«£=220,0 nm, >“£=308,0 nm. A termék deionizált vízben készített oldatához hozzáadunk 7,5 pH-értékű vizes hidroxilamin-oldatot. Az így kapott oldatban a PS—7 antibiotikum koncentrációja 20 fxg/ml, a hidroxilamin koncentrációja 10 mM. 30 percig 22 °C hőmérsékleten történő inkubáció után az oldat 308,0 nm-nél mért abszorpciója az eredeti értéknek mintegy 95%-ával csökken. 5. Infravörös abszorpciós spektrum A káliumbromid tablettával Hitachi Infrared Spectrophotometer Type 215 berendezésben mért infravörös abszorpciós spektrumot az 5. ábra mutatja. A megadott hullámszámoknál az alábbi jellemző abszorpciós maximumok találhatók: (i) 1760 cm-1 (ß-laktäm gyűrű —CO— csoportja) (ii) 1670 cm-1 (amid —CO— csoportja) (iii) 1620 cm-1 (—COOe és —CH=CH— csoport) 6. Proton magmágneses rezonancia spektrum A 6. ábra mutatja a 100 MHz-en nehéz vízben Nihon JNM Type PS—100 berendezésben vizsgált proton magmágneses rezonancia spektrumot. A jellemzők a következők : (i) tripled, melynek központja 0,96 ppm-nél van (CH3—ch2—) (ii) multiplet!, melynek központja 1,72 ppm-nél van ( CH2-CH3) (iii) éles szingulett 2,05 ppm-nél (CHj—CO—) (iv) multiplett 2,96—3,38 ppm-nél (—CH2—, —CH—) (v) szingulett, melynek központja 3,96 ppm-nél van N / —CH— (vi) két dublett, melynek központja 6,06 és 7,16 ppmnél van (J = 14 Hz) (—CH=CH—) 7. Színreakció Ehrlich-reagens reakció : pozitív Jód-klórplatinasav reakció: pozitív Ninhidrin reakció: negativ 8. Papírkromatográfia A PS—7 antibiotikums Toyo Filter Paper No. 50 (Toyo Roshi Co.) papíron végzett leszálló papírkromatográfiás vizsgálat során a következő Rf értékeket mutatja az alább felsorolt oldószerek alkalmazása esetén: acetonitril/trisz/EDT A1 : Rf = 0,41 etanol/víz (7/3): Rf=0,68 9. Vékonyréteg-kromatográfia Chromatogram Sheet 13254 cellulose (No. 6065) (Eastman Kodak Co.) alkalmazásával a PS—7 antibiotikum a következő R. értékeket mutatja az alább felsorolt oldószerek esetén: n-butanol/etanol/víz (4/1/5): fedőréteg Rf=0,65 n-propanol/víz (7/3): Rf=0,81 n-butanol/i-propanol/víz (7/7/6): Rf=0,71 acetonitril/víz (8/2): Rf=0,65 10. Nagyfeszültségű papír elektroforézis A PS—7 antibiotikum nagyfeszültségű papír elektroforézis vizsgálatát Toyo Filter Paper No. 50 (Toyo Roshi Co.) alkalmazásával 3,3 g dietilbarbitursavat, 25,5 g nátriumdietilbarbiturátot és 3000 ml vizet tartalmazó 8,6 pH értékű puffer-oldatban High-Voltage-Paper- Electrophoresis Apparatus (Savant Instruments Co., High voltage power supply HV 3000A, Electrophoresis vessel FP 18A) berendezésben vizsgáljuk. A PS—7 antibiotikum 30 perc alatt, 42 V/cm feszültség mellett 28 mm távolságba migrál az anód irányába. A fentiekben leírt fizikai-kémiai tulajdonságok alapján a PS—7 antibiotikum szerkezete az (Ib) képletnek felel meg. A PS—7 antibiotikum-nátrium-sója biológiai tulajdonságainak vizsgálatát az alábbiak szerint végezzük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 19
