179788. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új karbapeném-származékok előállítására
33 179788 34 9. Vékonyréteg-kromatográfia A PS—6 antibiotikum vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálatát Chromatogram Sheet 13254 cellulose (Eastman Kodak Co.) alkalmazásával végezzük. Az antibiotikum a következő Rf értékeket mutatja az alább felsorolt oldószerek esetén: n-butanol/etanol/víz (4/1/5) fedőréteg Rf=0,67 n-propanol/víz (8/2) Rf=0,69 n-butanol/i-propanol/víz (7/7/6) Rf=0,70 acetonitril/víz (8/2) Rf=0,68 10. Nagyfeszültségű papír elektroforézis A PS—6 antibiotikum nagyfeszültségű papír elektroforézis vizsgálatát az előzőekben megadottak szerint végezzük. A berendezés a Savant Instruments Inc. terméke (High Voltage Power Supply, Model No. HV 3000A és Flat Plate Electrophoresis, Model No. EP 18A). Az alkalmazott szűrőpapír Toyo Filter Paper No. 50. Az eredmények az alábbiak: A vizsgálatot 30 percig végezzük hűtés közben (4 °C hőmérséklet alatt) 3,3 g dietilbarbitursavat és 25,5 g nátriumdietilbarbiturátot és 3000 ml vizet tartalmazó puffer-oldatban (pH=8,6), a feszültség 42 V/cm. Ilyen feltételek mellett a PS—6 antibiotikum 28 mm-re mozdul el az anód irányába. A fentiekben leírt fizikai-kémiai vizsgálatok alapján a PS—6 antibiotikum szerkezete az (la) képletnek felel meg. A PS—6 antibiotikum-nátrium-sója biológiai tulajdonságainak vizsgálatát az alábbiak szerint végezzük. 1. Mikrobaellenes spektrum A PS—6 antibiotikum nátrium-sójának különböző rezisztens törzseket magukban foglaló patogén mikroorganizmusokkal szemben mutatott minimális gátló koncentráció értékeit BRAIN HEART INFUSION BROTH „Eiken” (EIKEN CHEMICAL CO., LTD) táptalaj alkalmazásával táptalajhígítási módszerrel határozzuk meg. A PS—6 antibiotikum-nátrium-sóját 5—100 [J-glrtú koncentrációban feloldjuk BRAIN HEART INFUSION BROTH „Eiken” táptalajban, melyből ugyanebben a folyékony táptalajban megfelelően hígított sorozatot készítünk. Az 5. táblázatban felsorolt mikroorganizmusokat 28 °C hőmérsékleten 18 órán keresztül tenyésztjük BRAIN HEART INFUSION BROTH „Eiken” táptalajban, majd beoltjuk a fentiek szerint elkészített megfelelően hígított sorozatba. A beoltás után az oltóanyag mennyisége 1 x 105 sejt/ml. A tenyészetet 35 °C hőmérsékleten 20 órán keresztül állni hagyjuk, majd a PS—6 antibiotikum minden hígításában megvizsgáljuk a mikroorganizmus növekedését. A minimális gátló koncentráció (MIC) a PS—6 antibiotikum nátrium-sójának az a legkisebb koncentrációja, melynél a kérdéses mikroorganizmus nem szaporodik. Kontrollvizsgálat céljára két ismert fi-laktám antibiotikumot, a cefazorint és cefoxitint 1—100 jj.g/ml koncentrációban 7,0 pH érték mellett feloldunk BRAIN HEART INFUSION BROTH táptalajban, az említett folyékony táptalajban különböző hígítású sorozatot készítünk és a minimális gátló koncentráció meghatározására a fentiek szerint kezeljük a hígításokat. A kapott eredményeket az 5. táblázatban foglaljuk össze. A PS—6 antibiotikumon kívül megadjuk az összehasonlítás céljául szolgáló cefazorin és cefoxitin minimális gátló koncentrációit is. 5. táblázat Minimális gátló koncentráció (j4g/ml) Mikroorganizmus PS—6 antibiotikumok Cefazorin Cefoxitin Staphylococcus aureus FDA • 209P 0,33 0,25 2,50 Staphylococcus aureus Bx—1633 0,33 0,50 2,50 Staphylococcus aureus Rassell 1,34 1,0 5,0 Diplococcus pneumoniae Type III4+ 0,17 0,125 2,50 Streptococcus pyogenes NY—54+ 0,33 0,25 1,25 Bacillus subtitis ATCC 6633 1,34 0,50 1,25 Alcaligenes faecalis B—326 1,56 6,25 1,56 Citrobacter freundii E—9+ 12,5 >100 >100 Serratia marcescens S—18+ 50,0 >100 50,0 Klebsiella pneumoniae K—2+ 12,5 6,25 6,25 Enterobacter sp. E—8+ 12,5 3,13 12,5 Enterobacter cloacaç E—16+ 25,0 >100 >100 Enterobacter aerogenes E—19+ 25,0 >100 >100 Proteus vulgaris P—5 25,0 >100 Proteus rettgeri P—73+ 6,25 25,0 Proteus mirabilis P—62+ 12,5 6,25 Proteus sp. P—22 12,5 >100 Providencia sp. P—82+ 12,5 50,0 + B-laktamáz termelő. 2+ Rezisztens kanamycinnel, gentamycinnel és tobramycinnel szemben. 3+ Rezisztens gentamycinnel és tobramycinnel szemben. 4+ 10% lóvért adunk a táptalajhoz. 2. Ismert (3-laktám vegyületek fí-laktamáz-rezisztens mikroorganizmusokkal szembeni mikrobaellenes hatásának növelése és az ezekkel együtt kifejtett szinergetikus hatás 10 ml 2,5-szeresre hígított tápanyagot tartalmazó agart (pH=7,0), mely 50 [ig/ml penicillin G-t vagy cefaloridint tartalmaz, beoltunk p-laktamáz termelő és ß-laktamäz-rezisztens mikroorganizmusokkal, majd az így kapott anyagot 9 cm átmérőjű Petri-csészébe öntjük, így állítjuk elő a biovizsgálati agar lemezt. Erre a vizsgá5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 17
