179665. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-fragmensek és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
15 179665 16 321. Dezamino-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (12. és 101.) Rf: 0,58 322. Boc-Met-GIu(OtBu)-His-Trp-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (1. és 102.) Rf: 0,70 323. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Leu-D-Lys(Boc)-Phe-Giy—OH (1. és 103.) R, : 0,65 324. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Val-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (1. és 104.) Rf: 0,70 325. Boc-Leu-Glu(OtBu)-His-Leu-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (21. és 103.) Rf: 0,66 326. Boc-Met-Ser-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (22. és 101.) Rf: 0,76 327. Boc-Met-Lys(Boc)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (19. és 101.) Rf: 0,69 328. N-acetil-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH A 14. pontban leírt módon és feltételek mellett állítjuk elő az N-acetil-Met-AIa-AIa-hidrazidot, azzal a feltétellel, hogy Boc-Met-hidrazid helyett N-acetil-Met-hidrazidot használunk. Rf: 0,55. 329. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Tyr-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (1. és 106.) Rf: 0,75 A fenti peptidek Rf értékeit szilícíumoxidon Bu : Py : : Ac : Wa 4 : 0,75 : 0,25 : 1 arányú eluáló elegyében mértük. 1. példa H-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys-Phe-Gly-D-Lys-Pro-Val--Gly-Lys-Lys—NH2 előállítása a) Boc-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly-D-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)—NH2 2,53 g Boc-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly— —OH-t (2,6 mmól) (lásd 302.) és 1,2 mólekvivalens 422 mg HOBt-t 25 ml DMF-ben oldunk. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, majd 2,48 g H-D-Lys(Boc)-Pro-Val-GIy-Lys(Boc)-Lys(Boc)—NH2.HCI-t (2,5 mmól), 20 ml DMF (205)-tel készített oldatát és 1,1 mólekvivalens TEA-t adunk hozzá. A reakcióelegy hőmérsékletét 35 °C-ra állítjuk, majd 857 mg DCCI-t (1,6 mólekvivalens) adunk hozzá ezen a hőmérsékleten és az egészet éjjel keverjük. Az elegyet —20 °C-ra lehűtjük és a keletkezett DCHU-t leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 200 ml szek-butanol és kloroform 2 : 3 arányú elegyében és 50 ml vízben oldjuk, majd vízzel, 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát oldattal, majd vízzel mossuk és végül nátrium-szulfáttal szárítjuk. A nátrium-szulfátot leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. Termelés: 4,2 g. Rf: Bu : Ac : Wa 10 : 1 : 3 arányú elegyében 0,75 szilíciumoxidon. bi H-Mct-Ala-Aía-Phe-D-Lys-Phe-Gfy-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys—NH2-a cetét Az a) pont szerint előállított 3,97 g Boc-Met-A!a-A!a-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly-D-Lys(Boc)-Pro-Val-GIy-Lys(Boc)-Lys(Boc)—NH2 80 ml 90%-os TFA-val készített oldatát nitrogén alatt és sötétben 1,5 óra hosszat keverjük szobahőmérsékleten. A szilárd anyagot 500 ml száraz éterhez csepegtetjük. A szilárd termeket leszűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk, majd a maradékot terc-butanol és víz 1 : 1 arányú elegyében oldjuk, majd ismét acetát formában levő ioncserélő gyantával kezeljük és szűrjük. A szűrletet szárazra pároljuk. Termelés: 2,27 g (65,8%). Rf : Bu : Py : Ac : Wa 38 : 24 : 8 : 30 arányú elegyében 0,40 (Woelm) szilikagé! vékonyréteg lemezeken. 2. példa H-Met(-* 02)-AIa-Ala-Phe-D-Lys-Phe-Gly-D-Lys--Pro-Val-GIy-Lys-Lys—NH2-acetát előállítása Az 1. példában előállított 2 g H-Met-Ala-AIa-Phe-D-Lys-Phe-Gly-D-Lys-Pro-Val-acetátot 10 ml vízben oldunk, majd 0,25 ml 0,5 mól ammónium-molibdátot, 1,25 ml 4 mól perklórsa vat és 0,75 ml 30%-os hidrogénperoxidot adunk hozzá. Az egészet 4 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, majd 50 ml terc-butanol és víz 1 : 1 arányú elegyét és 1 g Dovvex 2x8 ioncserélő gyantát adunk hozzá acetát formában. 30 percig keverjük, az ioncserélő gyantát leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. Termelés: 1,9 g. Rf : Bu : Py : Ac : Wa 38 : 28 : 8 : 30 arányú elegyében 0,32 (Woelm) szilikagél lemezeken. 3. példa H-Met(— 0)-AIa-A!a-Phe-D-Lys-Phe-GIy-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys—NH2-acetát Az 1. példában kapott 0,06 mól peptidet 5 ml ecetsavban oldjuk, majd 15 ix! 30%-os hidrogénperoxidot adunk hozzá. Az oldatot I óráig szobahőmérsékleten keverjük, majd 20 mg platina-oxid (platinum black) 2,5 ml jégecettel készített szuszpenzióját adjuk hozzá. Az elegyet 30 percig kevertetjük, majd leszűrjük. A szűrletet vákuumban szárazra pároljuk és a maradékot 10 ml tercier-butanol és víz elegyéhez adjuk. Az elegyet ezután liofilizáljuk. Rr: Bu : Py : Ac : Wa 38 : 24 : 8 : 30 arányú elegyében 0,29 (Woelm) szilikagél vékonyréteg lemezeken. 4. példa H-Met(—02)-Glu-His-Phe-D-Lys-Phe-Giy-D-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys—NH2-acetát előállítása 4,0 g 311. szerint előállított peptidet a 205. szerint előállított peptiddel kapcsoljuk össze a DCCI/HOBt módszer alkalmazásával, ahogy az 1. a) példában van leírva. A védett végtermék Rf értéke Bu : Ac : Wa 10:1:3 arányú elegyében 0,73 szilíciumdioxidon. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
