179665. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-fragmensek és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
13 179665 14 az elegybe. A katalizátort hyflon leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. Termelés: 7,27 g. Rf: Am : Py : Wa 5:3:2 arányú elegyében 0,36 szilíciumdioxidon. bí Z-D-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)— —NH2: 4,18 g Z-D-Ly5(Boc)—OH-t és 1,62 g HOBt-t 30 ml DMF-ben oldunk. Az oldatot lehűtjük —22 °C-ra és 7,26 g a) pont szerint előállított H-Pro-Val-Gíy-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OMe-t adunk hozzá 30 ml DMF- ben, majd 2,47 g DCCI hozzáadása következik. 15 percig keverjük —22 °C-on, majd 2 óra hosszat 0 °C-on és 16 óráig szobahőmérsékleten és a keletkezett DCFTU-t leszűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátban feloldjuk és egymást követőleg citromsavval, 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát oldattal, 30%-os nátrium-klorid oldattal mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk. Az oldatot szárazra pároljuk és a maradékot etilacetátból átkristályosítjuk. Termelés: 9,1 g. Olvadáspont: 114—119 °C. Rf: To : EtOFI 8 : 2 arányú elegyében 0,20 g szilíciumdioxidon. c) H-D-Lys(Boc)-Pro-VaI-GIy-Lys(Boc)-Lys(Boc)— —NH2: 3,68 g b) pont szerint előállított védett pepiidet 50 ml metanolban oldunk. 10%-os palládium-csontszén katalizátor hozzáadása után 4 óra hosszat hidrogéngázt vezetünk az oldatba. A katalizátort utána hyflcn leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. Termelés: 3,2 g. Rf: Bu : Ac : Wa 10:1:3 arányú elegyében 0,56 szi- Iíciumdioxidon. A terméket metanolos sósav oldatban feloldjuk és a megfelelő peptid hidroklorid sót kapjuk. 206. H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)—OH A megfelelő metilészter lúgos hidrolízisével a 201. példában leírt módon állítjuk elő. D) Az A) pontban kapott peptidet a B) pontban kapott pepiiddel kapcsoljuk össze azid módszer segítségével 301. Boc-Met-Ala-Ala-Ala-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (14. és 105. példák termékeiből) 1,62 g Boc-Met-Ala-Ala—N2H3-t 20 ml DMF-ben oldunk. Az oldatot lehűtjük —20 °C-ra, 1,68 ml 4,74n sósav és THF elegyet adunk hozzá, majd 0,60 ml izoamil-nitrit hozzáadása következik. 20 percig keverjük — 15 °C-on, majd 0,6 ml NEM-et, 2,3 g H-Ala-D-Lys(Boc)-Phe-GIy—OH 20 ml DMF-fel készített oldatát és 1,68 ml 4,74n sósav és THF elegyét adunk hozzá. A reakcióelegy pH-ját NEM-mel 7,2-re állítjuk és utána az elegyet 2 napig 4 °C-os hőmérsékleten tartjuk. A NEM.HCl-t leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 125 ml szek-butanol és kloroform 2 : 3 arányú elegyében és 25 ml vízben oldjuk, majd vízzel, 5%-os citromsav oldattal és ismét vízzel mossuk. Nátrium-szulfáttal szárítjuk és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot 40 ml metanolban oldjuk és 160 ml vizet adunk az oldathoz, majd a terméket leszűrjük és szárítjuk. Termelés: 2,6 g. Rf: Bu : Py : Ac : Wa 4 : 0,75 : 0,25 : 1 arányú elegyében 0,62 szilíciumdioxidon. Olvadáspont: 202—203 °C (bomlik). A 301. példában leírt feltételek mellett a következő peptideket állítjuk elő: 302. Boc-Met-A!a-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (14. és 101.) Rf: Bu : Py : Ac : Wa 4 : 0,75 : 0,25 : 1 arányú elegyében 0,63 szilíciumdioxidon; olvadáspont: 215— 216 C (bomlik). 303. Boc-Ala-Ala-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (15. és 101.) Rf: 0,59 304. Boc-VaI-A!a-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly-—OH (16. és 101.) Rf: 0,61 305. Boc-Met(— 02)-GIy-AIa-Phe-D-Lys(Boc)-Phe--Gly-OH (17. és 101.) - ■ ... Rf: 0,49 306. Boc-Met-GIu(OtBu)-AIa-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly -OH (18. és 101.) Rf: 0,64 307. Dszamino-Met-Ala-Ala-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (20. és 101.) Rf: 0,67 , ... 30S. Boc-Ala-A1a-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (23. és 101.) Rf: 0,50 309. Boc-A!a-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH Rf: 0,51 310. Boc-Met-Glu(OtBu)-Ala-Ala-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (18. és 105.) Rf: 0,64 311. Boc-Met(-02)-Glu(OtBu)-His-P.he-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (2. és 101.) 2,98 g (4,82 mmól) Boc-Met(—02)-Glu(OtBu)-His— —N2H3-t 20 ml DMF-ben oldunk és az oldatot lehűtjük 0 °C-ra, majd 2,65 ml 5,46n HC1 és THF elegyét adjuk a lehűtött oldathoz. Egy ideig keverjük az elegyet, majd tovább hütjük —20 °C-ra és 0,66 ml izoamilnitritet adunk hozzá. Az elegyet 20 percig keverjük — 15 =C-on, majd a 301. példában leírt módon folytatjuk a feldolgozást. A 311. pontban leírt módon a következő peptideket állítjuk elő: 312. Boc-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (1. és 101.) Rf: 0,69 313. Boc-Met-Glu(OtBu)-D-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (9. és 101.) Rf: 0,71 314. Boc-Val-D-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (3. és 101.) Rf: 0,65 315. Boc-Gly-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (4. és 101.) Rf: 0,60 316. Boc-D-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (5. és 101.) Rf: 0,68 317. Boc- ß-Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (6. és 101.) Rf: 0,62 318. Boc-(a-Met)-Ala-Glu(OtBu)-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (7. és 101.) Rf: 0,60 319. Boc-Val-Glu(OtBu)-D-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (10. és 101.) Rf: 0,64 320. Boc-Met-Gln-His-Phe-D-Lys(Boc)-Phe-Gly—OH (11. és 101.) Rf: 0,75 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
