179662. lajstromszámú szabadalom • Eljárás anyarozs-alkaloidák izolálására
Továbbá meglepő módon azt találtuk, hogy a mechanikus elválasztás után kapott alkaloid tartalmú mícélium-adszorbens elegy az alkaloidák izomerizálásE vágy bomlása nélkül konzerválható megfelelő mértékben à szokatlanul magas 80—90 °C hőmérsékleten fluidizációs szárítással, meghatározott fizikai körülmények betartása mellett. A kapott, tetszés szerint tárolható szárazmicélium-adszorbens massza gyengén lúgos vizes oldattal történő áztatás után szerves aprotikus oldószerrel kíméletesen és teljesen extrahálható. További vizsgálatokkal megállapítottuk, hogy a leírt szárítási eljárás olyan kultúráknál is alkalmazható, melyek valamennyi képződött alkaloidát a biomasszában tartalmaznak, tehát az adszorbens hozzáadása nem szükséges. Itt is a mechanikus feldolgozás és a fluidizációs szárítás után egy eltartható szárazmicéliumot kapunk, melyet a betakarítási időtől függetlenül dolgozhatunk fel. A találmány lényege tehát az, hogy a betakarított és az anyarozs-alkaloidák tetszőleges fajtáit, így ergokrip- 20 tint, ergotamint, ergokrisztint, ergokornint, ergometi int, lizergsavat, agroklavint, ergozint vagy egyebet tartalmazó kultúraszuszpenziót a felsorolt fajták vízoldható részeinek, elsősorban 4—5 súly% mennyiségű (a betakarított térfogatra vonatkoztatva) jelenlétekor egy duzzadóképes agyaggal 30 percen keresztül keverünk, a szilárd és folyékony részeket mechanikusan, például szűréssel elválasztjuk, a kapott nedvesmicéliumot, illetve nedvesmicélium-adszorbens elegyet fluidizációs szárítóban 80—90 CC hőmérsékleten 20—40 percen keresztül szárítjuk, miközben a kilépő levegő hőmérséklete 50— 70 °C és a maradék nedvesség legfeljebb 15% lesz, a szárazmicéliumot, illetve a szárazmicélium-adszorbens elegyet ha szükségünk van pépre, vizes gyengén lúgos oldattal, például 15%-os ammónia oldattal kezeljük, az extrakciót aprotikus szerves oldószerrel, például rövid láncú alkilkarbönsavészterrel, acetonnal vagy halogénezett szénhidrogénnel végezzük, a kapott extráktól adott esetben a nembázikus ballasztanyagok eltávolítása érdekében folyadék—folyadék extrakcióva! tisztítjuk 2 : 1— 1 : 1 térfogatarányú vizes—savas oldószerrel és a vizes, a teljes alkaloida ménnyiséget tartalmazó oldatot 8— 9,5 közötti pH-ra lúgosítjuk, majd szerves, vízzel nem elegyedő oldószerrel, előnyösen etilacetáttal 1 : 1— 3 : 1 arány mellett reextraháljuk. Az előtisztított extraktum további feldolgozását az alkaloida kémiai és fizikai tulajdonságainak figyelembevételével a szokásos módon végezzük. :: -- r 3 (körülbelül 30 perc). 20—24 kg szárazmicélium-bentonit elegyet kajkunk, melynek maradék nedvességtartalma 3—5%' és a kultúraszuszpenzióban meghatározott ergotoxin tartalom 95—100%-át, az ergometrin tartalom 5 92—96%-át tartalmazza. 179662 4 2. példa 10 Az 1. példában leírt Claviceps purpurea törzs 100 liter kultúraszuszpenzióját 5 kg derítőfölddel 1 órán keresztül kevertetjük, szűrjük és a nedvesmicélium-derítőföld elegyet fluidizációs szárítóban szárítjuk 80—90 °C hőmérsékleten, míg a kilépő-levegő hőmérséklete az 15 50 °C-ot eléri. Ily módon 12 kg szárazmicélium-derítőföld elegyet kapunk, melynek maradék nedvességtartalma 10—12% és alkaloid tartalma a kultúraszuszpenzióra vonatkoztatva 92—100%. 3. példa 10 kg 1. vagy 2. példa szerint előállított szárazmicélium-adszorbens elegyet 1,5 liter 1 : 2 hígítású vizes 25 ammónia oldattal duzzasztunk 5—10 percen keresztül, majd 40 liter etilacetáttal két részletben kevertetjük 15 percen keresztül ULTRA-TURRAX keverőn és leszűrjük; az összextraktot 20 liter 3%-os vizes foszforsavval a szeparátorba vezetjük. A nehéz fázist 8 liter 30 etilacetáttal átrázzuk, keverés közben koncentrált ammónia oldattal pH=8,5—9,0 értékig lúgosítjuk és 10 percen keresztül kevertetjük. A fázisok szétválása után az extrakciót 6—8 liter etilacetáttal kétszer megismételjük. Az egyesített extraktumokat vákuumbepár- 35 lóban, fiimbepárlóban vagy más kíméletes bepárló módszerre! 0,3—0,6 literre beszűkítjük, kétszeres mennyiségű kloroformmal elegyítjük és az ergometrint a nehezen oldódó kloroform-addukt formájában elválasztjuk. A szűrletből adszorpciós kromatográfiával, így oszlop- 40 vagy szakaszos kromatográfiával kinyerhető az ergotoxin benzol- vagy toluol-addukt formájában. Mindkét termék vékonyréteg-kromatográfiásan tiszta és bimaleinát formájában 96—103% alkaloid tartalmú. A kitermelés 58,6 g ergotoxin-toluol addukt, ami meg- 45 felel a kultúraszuszpenzió 72%-ának és 40,5 g ergometrin-kloroform addukt, ami megfelel a kultúraszuszpenzió 82%-ának. Kiviteli példák 1. példa A Claviceps purpurea (Fr.) Túl. IMET PA 130 törzs (letétben a Zentralinstitut für Mikrobiologie und experimentelle Therapie Jena intézetnél) 200 liter kultúraszuszpenzióját 8 kg bentonittal kevertetjük 30 percen keresztül, majd egy 10 mm-es kalcium-szulfát-dihidrát lemezzel ellátott forgó vákuumsejtszűrőn leszűrjük. A gyakorlatilag alkaloida-mentes szűrletet eldobjuk, a lejövő nedvesmicélium-bentonit elegyet fluidizációs szárítóban szárítjuk 90 °C bemenő-levegő hőmérsékleten, míg a kimenő-levegő hőmérséklete eléri a 60 °C-ot 50 4. példa 60 kg 1. vagy 2. példa szerint előállított szárazmicélium-adszorbens elegyet 7,5 liter 1 : 1 hígítású vizes ammónia oldattal duzzasztunk, keverős extraktorban 55 150 liter kloroformmal vagy metilénkloriddal 45 percen keresztül extrahálunk, az extraktumot nyomás alatt szűrjük és az extrakciót azonos mennyiségű oldószerrel 30 percen keresztül folyatjuk. Az összextraktumot 1 : 1 arányú 5%-os vizes borsav oldattal a szeparátorba ve- 60 zetjük, a vizes fázis pH-ját fokozatosan 9-re állítjuk és 2 ; 1 arányban adagolt azonos oldószerrel vagy etilacetáttal másodszor szeparáljuk. Bepárlás, az ergometrin elválasztása és az ergotoxin kicsapása után a 3. példa szerinti mennyiségű és minőségű adduktokat 65 kapjuk. 2
