179600. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a C-15003 P-3-antibiotikum előállítására
11 179i>00 12 5. táblázat Adalékanyag Adalékanyag mennyisége m Adagolási időpont (óra)1 Komponensek aránya (súly 7 ) P—2 P-3 P—4 Összhatás (Mg/ml)-15 60 25 18 L-valin 0,1 0 5 90 5 15 L-valin 0,3 0 3 94 3 15 L-valin 0,5 0 2 96 2 13 L-valin 0,3 48 3 94 3 13,5 nátrium-izobutirát 0.3 0 5 92 3 11 1. ,,0” idő azt jelenti, hogy a kiindulási táptalaj már tartalmazza az adalékanyagot. holkent például metanolt, etanolt, propánok vagy butanolt. míg rövidszénláncú ketonként például acetont vagy metil-etil-ketont használunk. Észterként például etil- vagy butil-acetátot használhatunk. Jellegzetes módon például úgy járhatunk el, hogy a nyers termé- 3( ket feloldjuk 607 metanolt tartalmazó vizes elegyben, majd a kapott oldatot a Mitsubishi Chemical Industries Ltd. japán cég által Diaion HP—10 márkanév alatt forgalmazott gyantából készült oszlopra felvisszük. Az oszlopot 707) metanolt tartalmazó vizes 3.eleggycl mossuk, majd a P—3 antibiotikumot 907 metanolt tartalmazó vizes eleggyel eluáljuk. A P-3 antibiotikumot tartalmazó frakciókat összeöntjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A száraz maradékhoz 5 - 8 térfogatrész etil-acetátot adunk, majd az 40 így kapott keveréket állni hagyjuk, amikor a P-3 antibiotikum kristályai válnak ki. A találmány szerinti eljárás végrehajtása során - miként említettük — a C-15003 antibiotikumok összmennyiségére vonatkoztatva a P—3 antibiotikum 4,; termelési aránya mintegy 907-ot vagy még ennél is többet érhet el. Ugyanakkor a találmány szerinti eljárás végrehajtása során - miként ugyancsak kifejtettük — a P—3 antibiotikum könnyen elkülöníthető a fermentléből. így a találmány szerinti eljárás rendkí- 50 vül előnyösnek tekinthető a P-3 antibiotikum ipari méretű előállítása szempontjából. A 4. példa szerint előállított P-3 antibiotikum fizikai-kémiai jellemzőit az alábbi 6. táblázatban adjuk meg. 5 ; Legjobb tudomásunk szerint a P—3, P—3’ és P—4 antibiotikumok új vegyületek, de a P—2 azonos a Kupchan és munkatársai által „maytansinol-propionate”-nak nevezett vegyülettel [The Journal of American Chemical Society, 97, 5294 (1975)] az elemzési 67 eredmények, a fajlagos forgatóképesség, az ibolyántúli abszorpciós spektrum, az infravörös abszorpciós spektrum és a tömegspektrum összehasonlítása alapján. A P—3 antibiotikum biológiai hatása az alábbi: 6 5 A) Antimikrobiális hatás Triptikáz-szójabab agart (PBL) mint vizsgálati táptalajt használva, az alábbiakban felsorolt mikroorganizmusokkal szembeni gátlási koncentrációkat papírkorongos módszerrel vizsgáljuk. így a Toyo Seisakusho japán cég által gyártott szűrőpapír-korongokat (vékony típusúak: átmérőjük 8 mm) P—3 antibiotikum 300 jug/ml koncentrációjú oldatából 0,02-0,02 ml-es aliquotokkal való átitatásuk után olyan agar-lemezekre helyezzük, amelyeket a következőkben felsorolt mikroorganizmusokkal oltottunk be. A P—3 antibiotikum hatástalan az alábbi baktériumokkal szemben: Escherichia coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens és Mycobacterium avium. Másrészt a Talaromyces avellaneus gomba növekedését a P-3 antibiotikum gátolja olyan agar-lemezen, amelynek anyaga 3,5 g nátrium-hidrogén-foszfát, 0,5 g kálium-dihidrogén-foszfát, 5 g élesztőkivonat (a Difco amerikai egyesült államokbeli cég terméke), 10 g glükóz, 15 g agar-agar és 1000 ml 7,0 pH-jú desztillált víz összekeverése útján állítható elő. Ezen az agar-lemezen tehát a P—3 antibiotikum minimális gátlási koncentrációja 1,0-1,5 pg/ml. Továbbá a Tetrahymena pyriformis W protozoát 20 g proteóz-peptonból (a Difco amerikai egyesült államokbeli cég terméke), 1 g élesztőkivonatból, 2 g glükózból, 1000 ml vízből és 10 ml 7,0 pH-jú 1 mólos foszfátpufferból álló táptalajon 28 °C-on 44-48 órán át tenyésztve, illetve a P-3 antibiotikumnak ezzel a protozoával szembeni gátlási koncentrációját sorozathígításos módszerrel meghatározva megállapítható, hogy a protozoa növekedésgátlása a P—3 antibiotikum 0,5 qg/ml-es koncentrációjánál következik be. A P-3 antibiotikum hatásos továbbá az alábbi mikroorganizmusokkal szemben: Fusicladium levieri, Helminthosporium sigmoidium var irreguläre, Pyri-6
