179599. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a C-15003 P-4 antibiotikum előállítására
179599 12 's/ méket csapadékként elkülönítjük. A nyers terméket ezután kívánt esetben szokásos tisztítási műveleteknek vetjük alá. E célra rutinjellegű tisztítási módszerként például adszorpciós kromatografálást végezhetünk, adszorbensként szokásos módon például szili- 5 kagélt, aktív alumínium-oxidot vagy egy makropórusos nem-ionos gyantát használva. A nyers termékből tehát a P—4 antibiotikumot például szilikagélen végzett kromatografálással különíthetjük el, futtatást például petroléter és hexán elegyével végezve, majd az 10 eluáláshoz egy poláris oldószert, például etil-acetátot, acetont, etanolt vagy metanolt, vagy pedig egy poláris oldószert, például metanolt vagy etanolt vagy egy ketont, például acetont vagy metil-etil-ketont tartalmazó halogénezett szénhidrogént, például diklór-me- 5 tánt vagy kloroformot használva. így tehát a P—4 antibiotikumot eluáljuk, szeparáljuk és kinyerjük. Ha a P-4 antibiotikum tisztítására egy makropó- :o rusos adszorbeáló gyantát használunk, akkor a P-4 antibiotikumnak az oszlopból való eluálását víz és egy rövidszénláncú keton vagy egy észter elegyével végezzük. Róvidszénláncú alkoholként például metanolt, etanolt, propanolt vagy butanolt, míg rövidszén- 75 láncú ketonként például acetont vagy metil-etil-ketont használunk. Észterként például etil- vagy butil-acetátot használhatunk. Jellegzetes módon például úgy járhatunk el, hogy a nyers terméket feloldjuk 60% metanolt tartalmazó vizes elegyben, majd a ka- '0 pott oldatot a Mitsubishi Chemical Industries Ltd. japán cég által Diaion HP-10 márkanév alatt forgalmazott gyantából készült oszlopra felvisszük. Az oszlopot 70%. metanolt tartalmazó vizes eleggyel mossuk, majd a P—4 antibiotikumot 90% metanolt 75 tartalmazó vizes eleggyel eluáljuk. A P-4 antibiotikumot tartalmazó frakciókat összeöntjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A száraz maradékhoz 5—8 térfogatrész etil-acetátot adunk, majd az így kapott keveréket állni hagyjuk, amikor a P-4 90 antibiotikum kristályai válnak ki. A találmány szerinti eljárás végrehajtása során — miként említettük — a C—15003 antibiotikumok összmennyiségére vonatkoztatva a P-4 antibiotikum 45 termelési aránya mintegy 65%>-ot vagy még ennél is többet érhet el. Ugyanakkor a találmány szerinti eljárás végrehajtása során - miként ugyancsak kifejtettük — a P-4 antibiotikum könnyen elkülöníthető a fermentléből. így a találmány szerinti eljárás rendkí- 50 vül előnyösnek tekinthető a P—4 antibiotikum ipari méretű előállítása szempontjából. A 4. példa szerint előállított P-4 antibiotikum fizikai-kémiai jellemzőit az alábbi 6. táblázatban adjuk meg. 5 5 Legjobb tudomásunk szerint a P—3, P-3’ és P—4 antibiotikumok új vegyületek, de a P—2 azonos a Kupchan és munkatársai által „maytansinol-propionate”-nak nevezett vegyülettel [The Journal of Ame- 60 rican Chemical Society, 97, 5294 (1975)] az elemzési eredmények, a fajlagos forgatóképesség, az ibolyántúli abszorpciós spektrum, az infravörös abszorpciós spektrum és a tömegspektrum összehasonlítása alapján. 65 11 6. táblázat Olvadáspont (°C) 177-180 Fajlagos forgatóképesség [<*ß2-142° + 10° (c = 0,522; CHClj) Elemzési eredmények talált értékek C =60,65% H = 7,05% N = 4,25% Cl = 5,23% Elemzési eredmények számított értékek C =61,05%, H = 6,99% N = 4,32% Ci= 5,46% Ibolyántúli abszorpciós spektrum nm-ben (e) (metanolban felvéve) 233(29900)240 (váll 28240) 252(27590) 289(5712) 288 (5680 Infravörös abszorpciós spektrum (cm-1 ) KBr-ban felvéve 1740, 1730, 1670, 1580, 1445, 1385, 1340, 1255, 1180, 1150, 1100, 1080, 1038 Mágneses rezonancia spektrum (ppm) 100 MHz, CDC13 1,03 (d) (6H) Tömegspektrum [m/e] 587,485,470,450 Oldékonyság petrolét erben, hexánban és vízben oldhatatlan benzolban és dietil-éterben rosszul oldódik kloroformban, etil-acetátban, acetonban, etanolban, metanolban, piridinben, tetrahidrofuránban vagy dimetil-szulfoxidban oldódik Színreakciók Dragendorff : pozitív Beilstein: pozitív A P—4 antibiotikum biológiai hatása az alábbi: A) Antimikrobiális hatás Triptikáz-szójabab agart (BBL) mint vizsgálati táptalajt használva, az alábbiakban felsorolt mikroorganizmusokkal szembeni gátlási koncentrációkat papírkorongos módszerrel vizsgáljuk. így a Toyo Seisakusho japán cég által gyártott szűrőpapír-korongokat (vékony típusúak: átmérőjük 8 mm) P—4 antibiotikum 300 /ig/ml koncentrációjú oldatából 6
