179569. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polién-makrolid-trimetilammónium-származékok szervetlen sóinak előállítására
179569 4 Polién-makrolidként alkalmazhatjuk például a következőket: nisztatin, polifungin, amfotericin B, kandicidin, pimaricin, trichomicin, levorin, rimocidin, kandidin, aureofacin, perimicin, mikoheptin. Szerves oldószerként alkalmazhatjuk például a következőket: dimetilacetamid, dimetilformamid, dimetilszulfoxid, 1—5 szénatomos alifás alkoholok elegye. Savkötőszerként alkalmazhatunk például nátriumhidrogén-karbonátot. Az aromás aminocsoportot tartalmazó polién-makrolidok aminocsoportja egy vagy két metilcsoporttal szubsztituálva van. Ilyen antibiotikumok például a levorin, a kandicidin, a trichomicin, az aureofacin és a perimicin. A találmányunk szerinti alkilezési eljárás során alkalmazott reakciókörülmények olyan enyhék, hogy az antibiotikumok nem szenvednek bomlást a reakció során. Ha a polién-makrolidokat az irodalomban ismertetett körülmények között kezelnénk dimetil-szulfáttal, ez a makrolid gyűrű felnyílását, a szénhidrát oldallánc lehasadását és a polién kromofor bomlását okozná, e változások következtében az antibiotikum elvesztené biológiai aktivitását. Néhány polién-makrolid antibiotikum és DMS származékaik in vitro mikrobaellenes hatását valamint hemolitikus aktivitását az 1. táblázat szemlélteti. .1 1. táblázat Néhány polién-makrolid és DMS származékaik fungicid és hemolitikus hatása Antibiotikum ICso (mcg/ml) EHso (mcg/ml) Pimaricin 1 100 DMS-pimaricin 1,7 400 Polifungin 0,08 20 DMS-polifungin 0,15 120 Nisztatin 0,1 50 DMS-nisztatin 0,25 100 Rimocidin 1,5 30 DMS-rimocidin 2,5 50 Amfotericin B 0,03 5 DMS-amfotericin B 0,08 5 Mikoheptin 0,05 15 DMS-mikoheptin 0,2 65 Kandidin 0,054 20 DMS-kandidin 0,15 70 Kandicidin 0,005 2,5 DMS-kandicidin 0,005 15 Aureofacin 0,005 0,35 DMS-aureofacin 0,003 15 Levorin 0,007 2,5 DMS-levorin 0,009 20 Trichomicin 0,005 3 DMS-trichomicin 0,01 10 Perimicin 0,002 5 DMS-perimicin 0,003 12 DMS-sel az antibiotikum N,N,N-trimetil-észterének vagy N,N,N-trimetil származékának sóját jelöljük, ICS o a vizsgált antibiotikumnak azt a koncentrációját jelenti, mely a Saccharomyces cerevisiae sejtjeinek növekedését standard folyékony közegben 50%-kal csökkenti, a mérést 24 órás, 28 °C hőmérsékleten való inkubálás után spektrofotometriásán végezzük, X = 600 nm hullámhosszon. EHS 0 a vizsgált antibiotikumnak azt a koncentrációját jelenti, mely standard körülmények közt a hemoglobin 50%-át bontja hemolitikusan, a mérést spektrofotometriásán végezzük X = 550 nm hullámhosszon. A kapott származékok szerkezetét spektroszkópiás módszerekkel bizonyítottuk. Példaként ismertetjük a kandicidin származék (a továbbiakban DMS-kandicidin) szerkezetének meghatározását, a vegyületet a kandicidint dimetil-szulfáttal alkilezve az ismertetett körülmények között nyerjük. Magának a kandicidinnek a savas lúdrolízisé a mikózamint eredményezi, a DMS-kandicidin N,N,N-trimetil-mikózaminná alakul. Ennek a vegyületnek a szerkezetét tömegspektroszkópiás (a bázision és molekulaion csúcsok ml = 206-nál jelentkeztek) és mágneses magrezonancia spektroszkópiás módszerrel (5 = 3,68-nál jelentkezik a nitrogénatomhoz kapcsolódó metilcsoporttól származó csúcs, melynek intenzitása háromszorosa a 6 = 1,68-nál jelentkező csúcsénak, utóbbi az aminocukor C—6 metilcsoportjának protonjától származik) határoztuk meg. A származék molekulájában levő észterkötés jelenlétét az IR spektrumban X = 1730 cnT'-nél észlelhető intenzív abszorpciós sáv jelzi, a módosítatlan antibiotikum színképében X= 1590 cm'1 -nél észlelhető abszorpciós sáv az észterszármazék spektrumából hiányzik. A kandicidin és DMS származékának elektronabszorpciós spektruma kismértékben különbözik az abszorpciós maximumok intenzitásában, a csúcsok helye és a spektrumok szerkezete azonban azonos. Ez azt bizonyítja, hogy a polién kromofor szerkezete nem változott az alkilezési reakció során. A per-O-trimetilszilil-DMS-kandicidin NMR spektrumában a metoxicsoportra jellemző sáv van 5 =3,65 értéknél, míg az N-metil protonokra jellemző sáv 5 = 3,03 értéknél található. A kandicidin lúgos vizes oldatainak kezelésekor p-amino-acetofenon szabadul fel, mimellett N- dimetil-DMS-kandicidin, N-metil-DMS-kandicidin és nem szubsztituált termék keletkezik 3:5:2 mólarányban. A találmányunk szerinti vegyületek előnye a természetes antibiotikumokkal összehasonlítva az, hogy igen jól oldódnak vízben, fungicid hatásuk igen jó és szelektív toxicitásuk jobb, mint a természetes antibiotikumoké. A találmány szerinti megoldást a következő példákkal kívánjuk szemléltetni, anélkül, hogy oltalmi körét a példákra akarnánk korlátozni. 1. példa 2 g polifungint (Ej = 800 304 nm-nél) feloldunk 10 ml dimetilformamidban és részletekben hozzáadunk 10 ml metanolt, 2 g nátrium-hidrogén-karbonátot és 1 ml dimetil-szulfátot. A reakcióelegyet 25 °C hőmérsékleten 10 óra hosszat keverjük, majd a fel nem oldódott nátrium-hidrogén-karbonátoi kicentrifugáljuk, a metanolt csökkentett nyomáson lepároljuk és a terméket etiléterrel kicsapjuk. A kicsapott anyagot feloldjuk 50 ml vízzel telített buta-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
