179497. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az inzulin-kiválasztást befolyásoló biológiailag hatásos anyag előállítására Bordetella-pertussis felhasználásával
15 179497 16 toknak, és pontosan 15 perccel később a fenti helyről ismét 0,1 ml vért veszünk. Az inzulinkiválasztási aktivitást a vér vérglükózszintjének és inzulinkoncentrációjának a különbségéből határozzuk meg a glükóz beadása előtt és után. A vérglükózszintet a glükózoxi- 5 dáz-eljárással, az inzulinkoncentrációt a kettős-antitest módszerrel mérjük. Az alábbi farmakológiái kísérletekhez használt parenterális oldat intravénás injekcióhoz a fent megadott összetételű. A vérglükóz és a plazmainzulin meghatározására szolgáló mérési módszerek a következő irodalmi helyekről ismertek, illetve a következő készleteket használtuk: Vérglükózszint: glükózoxidáz-módszer, Bergmeyer H. U. és Bemet E. szerint: „Methods of Enzymatic Analysis”, Bergmeyer H. U. New York, Academie Press, P 123 (193). Glükosztat Inzulinkoncentráció: kettős-antitest eljárás Morgan C. R. és Razarov A.: Diabetes, 12, 115 (1963). Insulin immunoassay kit, Dainabot Radioisotope Laboratories. Az inzulinkiválasztó aktivitás számítási módja: Először az alábbi egyenlet szerint kiszámítjuk a kezelt és a kontrollcsoport-beli kísérleti állatoknál az aktív anyag Al/AG értékeit: AI/AG OaE/mg) = Plazmainzulinkoncentráció a glükóz Plazmainzulinkoncentráció a glükóz beadása után OiE/ml) beadása előtt (/Æ/ml) Vérglükózkoncentráció a glükóz beadása után (mg/ml) Vérglükózkoncentráció a glükóz beadása előtt (mg/ml) A vérglükózszintet az aktivitás kiszámításához azért vonjuk be, mivel a vércukor.szint a kiválasztott inzulin mennyiségét nagymértékben befolyásolja. Valamennyi aktív anyag egységét a következő egyenlettel fejezzük ki: Egység = Átlag AI/AG a kezelt csoportnál - Átlag AI/AG a kontrollcsoportnál Átlag AI/AG a kontrollcsoportnál X 100 Az anyag fajlagos aktivitását úgy kapjuk meg, hogy az egységet elosztjuk a kapott proteinmennyiséggel (Lowry és társai szerint meghatározva). 45 összefüggés a dózis és a hatás között: Az 1. példa 1. pontja szerint előállított protein egységeit és dózisait (proteinban kifejezve) a 6. táblázat szemlélteti. 50 f 6. táblázat Dózis (ng/patkány) Egységx 8 62 16 53 32 54 63 81 125 104 250 129 500 208 1000 445 2000 571 xKözépérték 5 állatból 65 A szigeteket-aktiváló-protein tisztított mintája S-alakú dózis-hatás összefüggést mutat, de a görbének egy lehetőleg lineáris részét (250-1000 ng) választjuk ki a szigeteket-aktiváló-protein és az ezzel ekvivalens vegyületek egységeinek és tisztasági fokának a kiszámítására. 2. A proteinjellegű aktív anyag farmakológiai tulajdonságainak összefoglalása A találmány szerint előállított, biológiailag hatásos anyag elsősorban kitűnő inzulinkiválasztást serkentő aktivitásával tűnik ki, vannak azonban más, farmakológiailag értékes tulajdonságai is, így javítja a glükóztoleranciát, növeli az inzulinkiválasztás hatását, gyorsítja a sztreptozotocin által kiváltott diabetes gyógyulását és öröklött diabetesnél javítja a glükóztoleranciát. Előnyös továbbá, hogy ezek a hatások az anyag egyszeri beadásával több hétig, illetve több hónapig tartanak. Annak a ténynek az alapján, hogy a vizsgált állatokban, beleértve egereket, patkányokat és kutyákat, teljesen azonos jelenségeket találtunk, fel kell tételezni, hogy ennek az anyagnak a farmakoló-8
