179435. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai eszköz leukociták kimutatására testfolyadékokban és eljárás az ehhez megfelelő színképzők előállítására
7 179435 8 Szűrőpapírt (például Schleicher 4 Schüll 23 SL) egymásután a következő oldatokkal impregnálunk, és utána 60 °C-on megszárítjuk: 1. oldat: Dinátrium-tetraborat-dekahidrát 1,91 g 0,1 n sósavoldat körülbelül 20 ml Desztillált víz kiegészítve 100ml-re. Az oldatot 0,1 n sósavoldattal 9,0 pH-ra állítjuk be. 2. oldat: Di[N-(benziloxi-karbonil)-L-fenilalanilj-3’,5’,3”,5”-tetrabróm-fenolszulfonftalein | =di(N-benziloxi-karbonil-L-fenilalanil)-brómfenolkék] 0,123 g Aceton feltöltve 100 ml-re. így fehér tesztpapírt kapunk, amely leukocita-tar talmú vizeletbe mártáskor körülbelül 10 perc elteltével kékre színeződik. A teszt érzékenysége körülbelül 1000 leukocita//il. Hasonló tulajdonságokkal (érzékenység: 800 —3000 leukocita/fd) rendelkező tesztpapírokat kapunk, ha di[N-(benziloxi-karbonil)-L-fenila!anil]-3’,5’,3”,5”- tetrabróm-fenolszulfonftalein helyett a következő szubsztrátokát használjuk, mikor is leukocitatartalmú vizeletbe mártva minden esetben kék reakciótermékek keletkeznek: a) Di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alanil]-3’,5’,3”,5”-tetrabróm-fenolszulfonftalein[=di(N-benziloxi-karbonil-L-alaniD-bróm-fenolkék], b) DifN^N^-diíbenziloxi-karbonilj-L-lizil]-3’,5’,3”,5”-tetrabróm-fenolszulfonftalein/=di[Na,Nw-di(benziloxi-karbonil)-L-l izil]-b rómfenolkék/. c) Di[N-(benziloxi-karbonil)-0-acetil-L-tirozü]-3’,5’,3”,5”-tetrabróm-fenolszulfonftalein/=di[N-(benziloxi-karbonil)-O-acetil-L-tirozilj-brómfenolkék/. d) Di[N-(benziloxi-karbonil)-N-(etoxi-karbonil)-0-acetil-L-tirozil]-3’,5’,3”,5”-tetrabróm-fenolszulfonftalein/=di[N-(benziloxi-karbonil)-N-(etoxi-karbonil)-O-acetil-L-tirozüj-brómfenolkék/. e) DitN^benziloxi-karbonüj-N^-nitro-L-arginil]-3 ’,5 ’,3 ”,5 ’’-tetrabróm-fenolszulfonftalein i^dilN^-íbenziloxi-karbonilj-N^-nitro-L-arginil]-brómfenolkék/. f) Di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alanil-L-alanil]-3’,5’,3”,5”-tetrabróm-fenolszulfonftalein /=di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alanil-L-alanil ]-b rómfenolkék/. g) Di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alanil]-4,5,6,7,3 ’,5 ’,3 ”,5 ’’-oktabróm-fenolszulfonftalein /=di[N-(benziloxi-karbonil)-L-alanilj-tetrabrómfenolkék/. 4 2. példa Szűrőpapírt (például Schleicher & Schüll 23 SL) egymás után a következő oldatokkal impregnálunk, és utána 60 °C-on megszárítjuk: 1. oldat: Trisz(hidroxi-metil)-amino-metán 0,61 g 0,1 n sósavoldat körülbelül 5 ml Lauril-piridinium-klorid 0,2 g Desztillált víz feltöltve 100 ml-re. Az oldatot 0,1 n sósavoldattal 9,0 pH-ra állítjuk be. 3. példa 2. oldat: Diacetil-4,5,6,7,3 ’,5 ’,3”,5 ’’-oktabróm-fenolszulfonftalein (=tetrabrómfenolkék-diacetát) 0,107 g Aceton feltöltve 100 ml-re. Fehér tesztpapírt kapunk, amely leukocita-tartalmú vizeletbe mártva körülbelül 1 perc múlva kékre színeződik. A teszt érzékenysége körülbelül 500 leukocita/pl. Az 1. és 2. példa szerinti más szubsztrátokkal is készítettünk hálósítószerekkel, így például a fentebb alkalmazott lauril-piridinium-kloriddal, tesztpapírokat, amelyeknél a hálósítószer nélküli analóg tesztpapírokhoz képest a felére rövidült a reakcióidő. 4. példa Diacetil-4,5,6,7,3’, 5’,3”, 5’’-oktabróm-fenolszulfonftalein (-tetrabrómfenolkék-diacetát). 5,0 g (5 mmól) tetrabrómfenolkéket melegítés közben feloldunk 54 g = 50 ml (0,45 mól) frissen desztillált ecetsavanhidridben, és 3 órán át visszafolyó hűtő alatt forraljuk. Az oldat vákuumban való bepárlása után az olajos maradékot kevés izopropanollal elkeverjük, és toluolból átkristályosítjuk. Az így kapott diacetát 166—167 °C-on olvad, és 2 mól kristályecetsavat tartalmaz, amelyet foszfor-pentoxid felett 60 °C-on végzett szárítással eltávolítunk. így 4,2 g (77,4%) tetrabrómfenolkék-diacetátot kapunk színtelen kristályos anyagként, amelynek olvadáspontja 174 °C (bomlás). Hasonló módon kapjuk a megfelelően szubsztituált fenolszulfonftaleinekből a következő vegyületeket: a) Diacetil-3 ’,3”-diklór-fenolszulfonftalein (=klórfenolvörös-diacetát), színtelen kristályok, olvadáspont 132 °C (bomlás). b) Diacetil-5’,5”-dibróm-o-krezolszulfonftalein (=brómkrezolbíbor-diacetát), színtelen kristályok, olvadáspont 132 °C (bomlás). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 V_ >
