179435. lajstromszámú szabadalom • Diagnosztikai eszköz leukociták kimutatására testfolyadékokban és eljárás az ehhez megfelelő színképzők előállítására
5 179435 6 nyösen IO-3 - 10-2 mól/liter koncentrációban alkalmazzuk az impregnáló oldatban. A leukocita kimutatásra szolgáló diagnosztikai eszköz egyik további alkotórésze valamilyen megfelelő pufferrendszer. Foszfát-, barbiturát-, borát-, trísz(hidroxi-metil)-amino-metán[Trisz], 2-amino-2- -metil-l,3-propándiollAmediol], vagy aminosav-pufferok jönnek számításba, ahol a pH-értéket és kapacitást úgy kell megválasztani, hogy a tesztcsíknak a testfolyadékba való bemártása után ezen ó -10, előnyösen 7-9 közötti pH-érték álljon be. Előnyös továbbá a leukociták testfolyadékokban való kimutatására szolgáló, találmány szerinti diagnosztikai eszközök készítésénél tenzideket is alkalmazni, mivei ezáltal rövidebb reakcióidők érhetők el. Előnyösen kationaktív nedvesítő szereket, így például kvaterner piridiumsókat használnak 0,05- -2%, előnyösen 0,1 -0,5% koncentrációban. A találmány szerinti diagnosztikai eszköz előállítása céljából előnyösen szívóképes hordozókat, így például szűrőpapírt, cellulóz- vagy műszál-filcet tesztcsíkok készítéséhez alkalmazott szokásos reagensek (szubsztrát, puffer, adott esetben tenzidek vagy sűrítőszerek, így például polivinilpirrolidon, karboxi-metil-eellulóz és keményítő, stabilizálószerek, például aminosavak, háttérszínezékek, például tartrazin, stb.) könnyen illő oldószerekkel, így például vízzel, metanollal, etanollal vagy acetonnal készült oldataival impregnálunk. Ez célszerűen két külön műveletben történik. Először egy vizes oldattal impregnálunk, amely a puffert tartalmazza. Utána az I általános képletű észteráz-szubsztrát oldatával impregnálunk. Különleges esetekben fordított impregnálási sorrend is alkalmazható. A kész tesztpapírok önmagukban is használhatók vagy ismert módon fogókra ragasztva vagy előnyösen a 2 118 455 számú német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírás szerint műanyagok és finomlyukú szitaszövet közé hegesztve. így olyan diagnosztikai eszközt kapunk, amely a vizsgálandó testfolyadékba való bemártás után gyor san és egyszerűen kiértékelhető módon színreakcióval mutatja leukociták jelenlétét. Mivel a neutrofil leukocita-granulocitákban előforduló észterázok aktivitása a leukociták lízise után is teljesen megmarad, a találmány szerinti diagnosztikai eszközzel mind intakt mind autolizált leukociták mérhetők. Lízis-hiba következésképp nem fordul elő. 1. példa Szűrőpapírt (például Schleicher & Schüll 23 SL) egymásután impregnálunk az alábbi oldatokkal, és utána 60 °C-on megszárítjuk. 1. oldat: Trisz(hidroxi-metil)-anúno-metán 0,61 g 0,1 n sósavoldat körülbelül 5 ml Desztillált víz feltöltve 100 ml-re. Az oldatot 0,1 n sósavoldattal 9,0 pH-ra állítjuk be. 2. oldat: Diacetil-4,5,6,7,3’,5’,3” ,5 ’’-oktabróm-fenolszulfonftalein (=tetrabrómfenolkék-diacetát) 0,107 g Aceton feltöltve 100 ml-re. így fehér tesztpapírt kapunk, amely leukocita-tartalmú vizeletbe mártva kékre színeződik. Az elszíneződés ideje a következő: 5000 leukocita/pl vizelet, körülbelül 2 perc, 2000 leukocita/pl vizelet, körülbelül 5 perc, 1000 leukocita//rl vizelet, körülbelül 10 perc, 500 leukocita/iul vizelet, körülbelül 15 perc. A teszt érzékenysége körülbelül 500 leukocita/jd. Hasonló tulajdonságú tesztpapírokat (érzékenység: 300-1000 leukocita/jul) kapunk, ha diacetil-4,5 ,6,7,3 ’,5 ’,3 ”,5 ’’-oktabróm-fenolszulfonftalein (rietrabrómfenolkék-diacetát) helyett a következő szubsztrátokat használjuk: a) Diacetil-3,,3”-diklór-fenolszulfonftalein (=klórfenolvörös-diacetát) leukocita-tartalmú vizeletbe mártva vörös reakcióterméket eredményez. b) Diacetil-5 ’,5 ”-dibróm-o-krezolszulfonftalein (=brómkrezolbíbor-diacetát) bíborszínű reakcióterméket ad. c) Diacetil-3’,5,,3”,5”-tetrabróm-fenolszulfonft áléin (=brómfenolkék-diacetát) kék reakcióterméket ad. d) Diacetil-3 ’,3 ”-dibróm-5 ’,5 ”-diklór-fenolszulfonftalein (=brómklórfenolkék-diacetát) kék reakcióterméket ad. e) Diacetil-4,5,6,7-tetrabróm-3 ’,5 ’,3”,5 ”-tetraklór-fenolszulfonftalein (tetrabróm-tetraklórfenolkék-diacetát) kék reakcióterméket ad. f) Di-(klór-acetil)-3’,3”-dibróm-5,,5”-diklór-fenolszulfonftáléin (=brómklórfenolkék-di-klóracetát) kék reakcióterméket ad. g) Di-(klór-acetil)-3 ’,5 ’,3 ”,5 ’’-tetrabróm-fenolszulfonftalein (=brómfenolkék-di-klóracetát) kék reakcióterméket ad. h) Di-(klór-acetil)-4,5,6,7,3 ’,5 ’,3 ”,5 ”-oktabróm-fenolszulfonftalein (=tetrabrómfenolkék-di-klóracetát) kék reakcióterméket ad. i) Di-(2-metoxi-propionil)-4,5,6,7,3 ’,5 ’,3 ”,5 ”-oktabróm-fenolszulfonftalein [=tetrabrómfenolkék-di-(2-metoxi-propionát)] kék reakcióterméket ad. j) Dibenzoil-4,5,6,7,3,,5,,3”,5”-oktabróm-fenolszulfonftalein (rietrabrómfenolkék-dibenzoát) kék reakcióterméket ad. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
