179425. lajstromszámú szabadalom • Eljárás citromsav előállítására
5 179425 6 Az élesztőt ferde-agaron 3 napig 28—30 °C-on tenyésztjük. A sejt-szuszpenziót az agarizált közegből 250 ml-es, 50 ml oltóanyagot tartalmazó lombikba visszük át. Az oltóanyag előállítására és a fermentáció kivitelezésére szolgáló közeg összetétele az alábbi: n-hexadekán ammónium-szulfát magnézium-szulfát-heptahidrát nátrium-klorid kálicum-nitrát kálium-dihidrogén-foszfát dikálium-hidrogén-foszfát élesztő-autolizátum Burkholder-féle mikroelem-adalék 0,8 súly% 0,03 súly% 0,07 súly% 0,05 súly% 10 0,04 súly% 0,1 súly% 0,01 súly% 2 ml A lombikokat 48 órán át 200 perc'1 frekvenciájú rázóasztalon tartjuk. Az oltóanyaggal fermentációs közeget oltunk be úgy, hogy az oltóanyag mennyisége a közegben 5%-a legyen. A fermentációt 5 napon át, 20 50 ml közeget tartalmazó 250 ml-es lombikokban különböző pH értékek mellett végezzük. A kívánt pH-értéket steril nátriumhidroxid-, illetve kénsav-oldat hozzáadásával állítjuk be. A kapott eredményeket az alábbi 1. táblázatban foglaljuk össze. 25 1. Táblázat Citromsav 30 kitermelése A közeg Citromsav Izocitromsav a bevitt pH-ja g/liter g/liter alkánok súlyára vonatkoz- 35 _____________________________________tatva,% 3,0 nyomokban 0 4,0 3,7 0,4 46,3 5,0 9,3 1,0 116,3 6,0 12,4 1,4 155,0 7,0 11,3 1,3 141,3 8,0 10,5 1,2 131,3 2. példa Az élesztőt az 1. példában leírt módon ferde-agaron tenyésztjük. A sejt-szuszpenziót az agarizált közeggel 50 ml tápközeget tartalmazó 750 ml-es lombikba visszük át. A tápközeg összetétele az alábbi: Ci 2-19 n-alkánok elegye 24,0 g/liter ammónium-szulfát 1,2 g/liter magnézium-szulfát-heptahidrát 0,7 g/liter nátrium-klorid 0,5 g/liter kalcium-nitrát 0,4 g/liter kálium-dihidrogén-foszfát 1,0 g/liter dikálium-hidrogén-foszfát 0,1 gfliter mikroelem-adalék A tenyészeteket 200 perc-1 frekvenciájú rázóasztalon 72 órán át inkubáljuk. Az így nyert oltóanyag 0,5 literével 5 literes fermentorban levő 4,5 liter fenntartó közeget oltunk be, amelynek az összetétele az alábbi: Ci 2-19 n-alkánok elegye 72,0 g/liter ammónium-szulfát 0,9 g/liter magnézium-szulfát-heptahidrát 1,4 g/liter nátrium-klorid 0,5 g/liter kalcium-nitrát 0,8 g/liter kálium-dihidrogén-foszfát 2,0 g/liter dikálium-hi drogén-foszfát 0,2 g/liter élesztő-autolizátum 2 ml Burkholder-féle mikroelem-adalék kétszeres mennyiség A közeg pH-értékét 10%-os nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával állandó értéken tartjuk. Az oxigén koncentrációját (a telítettség 25, 50, illetve 75-90%-ának megfelelő érték) a fermentációs folyamat alatt állandó értéken tartjuk, ezt a keverőszerkezet forgási sebességének változtatásával és az egységnyi idő alatt a fermentorba beengedett levegő mennyiségének szabályozásával érhetjük el. A 2. táblázatban az elérhető legnagyobb sav-koncentrációját az oxigén-koncentráció függvényében mutatjuk be. 3. példa A Candida lipolytica CMPM Y-184 törzset ferde-agaron 28-30 °C-on 3 napon át tenyésztjük. A ferde-agar lemosásával ‘kapott sejt-szuszpenzióval 2. Táblázat A közeg telítettsége oxigénnel %-ban Fermentáció ideje, óra Citromsav g/1 Izocitromsav g/1 Citromsav kitermelése a bevezetett alkánra vonatkoztatva, % 25 108 40,6 3,0 56,4 50 108 48,0 4,0 66,6 75-90 84 00 © i 7,5 112,5 3
