179425. lajstromszámú szabadalom • Eljárás citromsav előállítására
7 179425 8 750 ml-es lombikokban levő 50-50 ml tápközeget oltunk be, amelynek összetétele az alábbi: Ci 2-19 n-alkánok elegye ammónium-szulfát magnézium-szulfót-heptahidrát nátrium-klorid kalcium-nitrát kálium-di hidrogén-foszfát dikálium-hidrogén-foszfát élesztő-autolizátum mikroelem-adalék Burkholder szerint 48,0 súly% 3.0 súly% 5 0,7 súly% 0,5 súly% 0,4 súly% 1.0 súly% 0,1 súly% 10 4.0 ml Rázóasztalon végzett 48 órai inkubálás után a kapott oltóanyaggal friss közeget tartalmazó lombiko- 15 kát oltunk be, a közegre 6% oltóanyagot számítunk. A második sorozat lombikot is rázóasztalra tesszük és 28-30 °C-on 50 órán át folytatjuk a tenyésztést. A közeg pH-értékét steril 10%-os nátrium-hidroxid-oldattal 6,0-6,5 közötti állandó értéken tartjuk. Az így 20 kapott tenyészet 500 ml-jével 10 liter űrtartalmú fermentorban levő 3,5 liter fermentáló közeget oltunk be, amely az alábbi komponenseket tartalmazza: Cl 2-19 n-alkánok elegye ammónium-szulfát magnézium-szulfát-heptahidrát nátrium-klorid kalcium-nitrát kálium-dihidrogén-foszfát dikálium-hidrogén-foszfát élesztő-autolizátum Burkholder-féle mikroelem-adalék 600 g 20,0 g 2,8 g 1.5 g 1.6 g 4.0 g 0,4 g 8.0 ml A kultúrát 29-30 °C-on erélyes keverés és levegőz- 35 tetés közben tenyésztjük, pH-értékét nátriumhidroxid-oldat adagolásával 6,0 és 6,5 közötti állandó értéken tartjuk. 144 órai tenyésztés után a citromsav koncentrációja 217 g/liter, ugyancsak az izocitromsav koncent- 40 rációja csak 6 g/liter. A fermentlé összesen 868 g vízmentes citromsavat, illetve 942,2 g citromsav-monohidrátot tartalmaz. A citromsav hozama - a bevitt n-alkánra vonatkoztatva - 154%, monohidrátban kiszámítva 158%. 45 4. példa A 3. példa szerint előállított oltóanyagot 63 literes 50 majd 400 literes fermentorban tenyésztjük az alábbi összetételű közegben Ci 2-19 n-alkánok elegye 48,0 g/liter ammónium-szulfát 6,0 g/liter magnézium-szulfát-heptahidrát 0,7 g/liter nátrium-klorid 0,5 g/liter kalcium-nitrát 0,4 g/liter kálium-dihidrogén-foszfát 1,0 g/liter dikálium-hidrogén-foszfát 0,1 g/liter élesztő-autolizátum 2,0 ml Burkholder-féle mikroelem-adalék A folyamat mindegyik fermentorban 48 óráig tart, 28-30 °C-os hőmérsékleten és 5,0-5,5 pH-értéken. A fő fermentációs folyamatot 3000 liter űrtartalmú fermentorban hajtjuk végre. A berendezést 0,6 részéig töltjük meg. A táptalaj 10%-ának megfelelő mennyiségű oltóanyagot viszünk be. A fermentációs közeg összetétele az alábbi: Ci 2-19 n-alkánok 100 g/liter ammónium-szulfát 5,0 g/liter magnézium-szulfát-heptahidrát 1,4 g/liter nátrium-klorid 0,5 g/liter kalcium-nitrát 0,8 g/liter kálium-dihidrogén-foszfát 2,0 g/liter dikálium-hidrogén-foszfát 0,2 g/liter élesztő-autolizátum 4,0 ml Burkholder-féle mikroelem-adalék A fermentációt 28-30 °C-os hőmérsékleten végezzük. A közeg pH-ját 20%-os, steril nátriumhidroxid-oldattal 5,6 és 6,0 közötti állandó értéken tartjuk. A fermentációs közeg oxigén-koncentrációját 50-80%-os telítettségi fokra állítjuk be. A fermentáció folyamán a 2-4. napon 24 óránként adunk n-alkánt a fermentáló közegbe, valamennyi adag a közeg mennyiségének 2%-a. A fő fermentáció 120 óra hosszat tart. A fermentáció végén a berendezésben levő fermentlé összcitromsavtartalma 368 kg. Vízmentes citromsavban kifejezve a hozam 128%, a bevitt paraffin súlyára vonatkoztatva. Szabadalmi igénypont: Eljárás citromsav előállítására fermentációs úton Candida lipolytica törzzsel, szénforrásként 12-19 szénatomszámú n-alkánt tartalmazó táptalajon levegőztetés közben, azzal jellemezve, hogy a fermentációt a CMPM Y-184 szám alatt letétbe helyezett Candida lipolytica törzzsel végezzük legfeljebb 8,0 pH-értéken. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 83.4137 - Zrínyi Nyomda, Budapest 4
