179353. lajstromszámú szabadalom • Eljárás akuleacin-AÓ-Aš, -DÓ és-Dš antibiotikum előállítására
9 179353 10 a találmány szerinti akuleacinok folyadék-kromatográfiás retenciós ideje különbözik az ismert akuleacin-A-tól, -D-től és Echinocandin B-töl, mivel az akuleacin-Aa retenciós ideje 7,9 perc, az akuleacin-Ay-é 12,3 perc, és hidrolízisük során az akuleacin-Aa-ból és -Da-ból mirisztinsav, az akuleacin-A-ból és -D-ból palmitinsav és az Echinocandin B-ből linoleinsav és sztearinsav képződik. Tehát az akuleacin-Aa, -Ay, -Da és -Dy az ismert antibiotikumoktól eltérő új antibiotikumok. Az akuleacinok biológiai tulajdonságai a következők: 80%-os növekedést gátló koncentráció ( /ml) Akuleacin-Aa -A 7 -Da -Dy Trichophyton asteroides 0,004 0,004 0,001 0,002 Trichophyton rubrum 0,006 0,006 0,002 0,003 Microsporum gypse um 0,008 0,008 0,002 0,004 Fusarium oxysporum f. lini 2,0 2,0 0,1 1,0 Dialorthe phaseolorum 0,01 0,01 0,0025 0,005 Ascochyta soyaecola 0,08 0,08 0,02 0,04 Sclerotium bataticola 0,08 0,08 0,02 0,02 Glomerella cingulata 0,06 0,03 0,01 0,03 Helminthosporium oryzae 0,008 0,008 0,002 0,004 25 Akut toxicitás egéren: A nátrium-dezoxikoláttal készített akuleacin in- 30 jekcióval kapott LDS 0 értékek a következők: Beadás módja LD50 (mg/kg) Aa Ay Da Dy intravénásán 350 350 intramuszkulárisan 600 600 1000 1000 A következő példák szemléltetik a találmány szerinti eljárást anélkül, hogy azt ezekre korlátoznánk. 1. példa 100 ml, 2% glükózt, 1% polipeptont, 1% kukoricalekvárt, 0,2% káliumhidrogénfoszfátot és 0,1% kristályos magnéziumszulfátot tartalmazó vizes 50 táptalajt 500 ml-es Erlenmayer-lombikban (pH-értéke 6,5) 15 percig 120°C-on sterilizálunk. A táptalajt beoltottuk Aspergillus aculeatus M 4845 (NRRL 11270) mikroorganizmussal és 48 óra hoszszat 26 °C-on ráztuk. A tenyészetet aszeptikusán 55 hozzáadtuk 15 liter, 1,5% szacharózt, 1,4% dextrint, 2% polipeptont, 0,45% kukoricalekvárt, 0,2% káliumhidrogénfoszfátot, 0,1% magnéziumszulfátot és habzást gátlót (BC—51Y, Nippon Yushi Co.) tartalmazó, 6,5 pH-értékű vizes táptalajhoz 30 literes fer- 60 mentorban és a fermentációt 26 °C-on, 96 óra hoszszat, 30 liter/perc levegőztetés és 250/perces keverés közben folytattuk. Körülbelül 15 liter fermentlevet kaptunk. A fermentlében meghatároztuk a szüredék és a micélium akuleacin aktivitását. $5 2. példa Az 1. példában kapott 10 liter fermentlevet leszívatva 1 kg nedves micéliumot kapunk. A nedves rnicéliumhoz 5 liter metanolt adunk, 2 óra hosszat keverjük, és a metanolos oldatot vákuumban leszűrjük. A micélium maradékot ismét 5 liter metanollal extraháljuk. Mindkét kivonatot egyesítjük és a metanolt csökkentett nyomáson ledesztillálva 2 liter sűrítményt kapunk. A sűrítményhez 2 liter vizet adunk és 2 ízben 2—2 liter n-butanollal extraháljuk. Az n-butanolos rétegeket összegyűjtjük, és 5 liter vízzel mossuk, majd vákuumban kevés víz hozzáadásával besűrítjük, sötétbarna, sűrűnfolyó sűrítményt kapunk. Ehhez 500 ml n-hexánt adunk, a kivált csapadékot etilacetáttal mossuk és 12,5 g nyers akuleacin keveréket kapunk. 3. példa A 2. példában kapott 12,5 g nyers akuleacin keveréket feloldjuk kevés metanolban, majd 25 g kovasavgélen (Merck AG készítménye) adszorbeáltatjuk és a metanolt csökkentett nyomáson elpárologtatjuk. A kovasavgélt 600 g kovasavgéllel töltött, 50 mm belső átmérőjű oszlopra visszük és ) 0 : 1,5 : 0,7 arányú etilacetát-izopropanoi-víz elegygyel eluáljuk, majd 45 ml-es frakciókat gyűjtünk. 4. példa A 3. példában kapott 43—57. frakciókat egyesítjük és vákuumban szárítjuk. A kapott száraz anyag metanollal készült oldatából 10/il-t nagynyomású folyadékkromatografálásnak vetünk alá (Hitachi 634 típusú készülék, oszlop: 5 x 500 mm, hordozó: poli-5
